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目的：研究系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓间质干细胞（MSC）生物学特性、染色体核型异常与否、多种细胞因子在mRNA水平的表达情况，以及MSC在体内对造血支持的影响。探讨MSC异常在SLE发生、发展中的作用。方法：抽取11例SLE患者和6例正常人骨髓，Ficoll（1.077g／L）密度梯度离心，接种于含10％胎牛血清的L-DMEM完全培养液，置5％CO2、37℃、饱和湿度培养箱，2～3天换液去除非贴壁细胞，90％融合时0.25％胰酶消化传代。取P2代细胞消化后与FITC或PE标记的鼠抗人CD14、CD29、CD34、CD44、CD45、CD105、HLA-DR抗体作用，经流式细胞仪检测。对P2代细胞采用秋水仙素终止法原位收获MSC染色体，显微镜行染色体核型分析。取P2代细胞制备单细胞悬液，通过消化计数法绘制12天MSC生长曲线。取P2代细胞，Trizol试剂盒提取细胞总RNA，半定量RT-PCR方法在mRNA水平上检测SLE患者骨髓中白细胞介素-6（IL-6），IL-7，IL11，巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）和干细胞因子（SCF）细胞因子的表达。取P2代细胞输注CTX 50mg·kg-1预处理的ICR小鼠，分为SLE患者MSC输注组、正常人MSC输注组，对照组（输注生理盐水），观察正常人和SLE患者骨髓MSC对小鼠造血支持的影响。采用SPSS11.5统计分析软件包进行数据分析计算。结果：MSC原代培养3～12天后，可出现单个或少量集落生长的贴壁细胞，8～37天后，集落不断扩大并形成融合单层，细胞呈长梭形，大小均一。原代培养可收获（0.5～1）×106个细胞。原代培养时间SLE为26±7.76天，正常人为17±5.64天（t=2.507，P=0.029）。倒置显微镜观察两组MSC形态学没有显著差异。两组MSC均表达CD29、CD44、CD105，不表达CD14、CD34、CD45，HLA-DR，纯度大于97％。两组染色体核型均为正常染色体核型。MSC生长曲线为S形，接种3天始细胞开始增殖并进入对数生长期，8天后进入平台期。正常人对照组骨髓MSC生长较SLE患者组活跃（P＜0.01）。两组P2代MSC均表达IL-6，IL-7，IL11，M-CSF和SCF，但SLE患者组MSC IL-6、IL-7表达降低（P＜0.01）。SLE患者和正常人骨髓MSC输注经环磷酰胺预处理的ICR小鼠后，小鼠生命体征平稳，无排斥反应发生。SLE患者骨髓MSC输注组小鼠和正常人骨髓MSC输注组小鼠白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板恢复均快于对照组（P＜0.05）。结论：建立SLE患者骨髓MSC分离、培养体系。SLE患者MSC表达CD29、CD44、CD105，而不表达CD14、CD34、CD45和HLA-DR，P2代后细胞均一性较高。SLE患者MSC体外生长存在缺陷，在染色体核型方面无原发缺陷。SLE患者MSC细胞因子分泌异常，可能造成SLE造血系统受损和免疫系统紊乱。SLE患者MSC可促进小鼠早期造血恢复。为临床选择MSC移植治疗SLE提供了依据。目的：探讨狼疮鼠（MRL／lpr）及正常鼠（C57BL／6）骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）体外生物学特性、对T淋巴细胞免疫调节作用的影响。方法：采用直接贴壁法分离培养扩增两种鼠系骨髓MSC，流式细胞术鉴定MSC表面标记物，观察MSC生长状况并绘制生长曲线；取C57BL／6鼠脾脏细胞，经尼龙毛柱分选CD3+T淋巴细胞，经刀豆蛋白A（ConA）刺激，取正常及狼疮鼠MSC或MSC培养上清与T细胞共培养72h，然后CFSE染色测定T细胞增殖，流式细胞术检测共培养前后T细胞活化及T细胞的凋亡率。结果：第2代（P2）代后狼疮MSC生长增殖快于正常MSC；与正常及狼疮鼠MSC共培养均可抑制正常鼠T细胞的增殖（P＜0.05），与MSC上清共培养对正常鼠T细胞增殖无抑制作用（P＞0.05）；与两种MSC或上清共培养均可降低正常T细胞的活化（P＜0.05）及凋亡率（P＜0.05）。对正常T细胞增殖、活化、凋亡的影响，狼疮MSC与正常MSC间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：狼疮鼠MSC在体外生长上存在异常，但对T细胞增殖、活化、凋亡免疫调节无异常。目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者骨髓间质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）体外对B淋巴细胞的免疫调节作用是否存在异常。方法：采用直接贴壁法分离培养正常人及SLE患者MSC。免疫磁珠法分选正常人外周血B淋巴细胞，与MSC共培养，流式细胞术检测B细胞凋亡及表面标志表达，[3H]掺入法检测B细胞增殖，酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中免疫球蛋白IgG、IgM和IgA水平。结果：①B细胞+正常MSC共培养组B细胞增殖（4306.8±307.9cpm）较单纯B细胞培养组（7058.7±346.1cpm）降低（P＜0.05）；②B细胞+正常MSC共培养组B细胞凋亡率（13.5％±6.7％）低于单纯B细胞培养组（24.8％±8.0％）（P＜0.05）；③B细胞+正常MSC共培养组B细胞表面CD86表达率（52.6％±5.1％）较单纯B细胞培养组（66.2％±10.2％）低（P＜0.05）；④与MSC共培养后，B细胞分泌免疫球蛋白IgG、IgM和IgA较单纯B细胞培养显著减少（P＜0.05）；⑤B细胞+狼疮MSC共培养组与B细胞+正常MSC共培养组比较，B细胞增殖、凋亡、CD86表达和Ig分泌两组间差异无显著性。结论：MSC在体外对B细胞有抑制作用，SLE患者骨髓MSC与正常MSC相比，对B细胞的表面刺激分子表达、增殖、Ig分泌有相似的抑制作用。目的：探讨人骨髓间质干细胞（MSC）移植对MRL／lpr狼疮鼠的疗效及作用机制。方法：体外分离、培养、扩增正常人MSC。MRL／lpr鼠随机分为环磷酰胺（CTX）治疗组、MSC治疗组和MSC+CTX治疗组。16周龄时，CTX组和MSC+CTX组给予CTX100mg／kg×2d腹腔注射，24h后MSC组和MSC+CTX组经尾静脉移植人MSC。考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白含量，间接免疫荧光检测血清抗核抗体（ANA）、抗双链DNA（ds-DNA）抗体滴度，流式细胞仪检测外周血T细胞亚群，免疫荧光检测肾小球补体C3。结果：①24、28、32周24h尿蛋白定量MSC组（4.3±0.8mg，5.4±0.8mg，5.8±0.8mg）和MSC+CTX组（2.8±1.0mg，3.9±0.4mg，4.5±1.0mg）均显著低于对照组（9.0±1.3mg，9.3±0.6mg，10.0±1.6mg）（P＜0.05）；MSC+CTX组（2.8±1.0mg，3.9±0.4mg，4.5±1.0mg）显著低于CTX组（5.1±1.0mg，7.7±1.1mg，9.6±1.9mg）（P＜0.05）。②28周龄时抗ds-DNA抗体滴度MSC+CTX组（2.7±0.8）显著低于对照组（4.6±0.9）（P＜0.05）。③32周龄时体重MSC组（38.6±3.3g）和MSC+CTX组（35.8±3.7g）显著高于对照组（32.8±3.0g）（P＜0.05）。④32周龄时，血清肌酐MSC组（13.5±2.2μmol／L）和MSC+CTX组（12.7±4.2μmol／L）均显著低于对照组（20.8±5.1μmol／L）（P＜0.05）。⑤32周龄时CD4+T细胞和Th2亚群MSC组（76.4％±1.9％，58.4％±1.8％）和MSC+CTX组（73.9％±3.2％，57.6％±3.2％）均显著低于对照组（82.7％±2.9％，64.2％±2.8％）（P＜0.05）。⑥治疗组肾小球中C3的沉积显著减少，肾脏组织学病变改善。结论：人MSC移植治疗MRL／lpr鼠有效，调节Th1／Th2平衡，抑制B细胞抗体产生，可能是MSC移植治疗MRL／lpr鼠有效的机制之一。