链球菌制剂甘露聚糖肽联合放射治疗对肺腺癌A549细胞作用的实验研究

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目的:研究链球菌制剂甘露聚糖肽对肺腺癌A549细胞株的细胞毒活性,并联合射线对A549细胞的作用及相关机制,为肺癌的联合治疗提供理论依据。方法:1.以不同浓度的甘露聚糖肽作用于肺腺癌A549细胞,做药物MTT实验获得药物对细胞的增殖抑制率并计算IC50;以不同剂量的X射线作用于A549细胞,行射线MTT实验选择合适的照射剂量。2.行集落形成实验观察甘露聚糖肽对A549细胞的最佳照射时间以及放射敏感性并绘制细胞存活曲线,计算放射增敏比。3.应用流式细胞仪技术分析药物和射线单独及联合作用对细胞周期以及凋亡的影响。4.免疫细胞化学染色分析药物和射线单独及联合作用对细胞p53(突变型)表达的影响。结果:1.MTT实验结果显示:分别用不同浓度甘露聚糖肽(100、200、300、400、500、600、700、800μg/ml)作用于肺腺癌A549细胞24h后,其增殖抑制率分别为11.11%、17.00%、26.75%、42.67%、51.01%、54.94%、67.02%、75.61%。甘露聚糖肽对A549细胞的抑制率与浓度呈正相关(r=0.994,P<0.001),IC50=475.91μg/ml。在一定的射线剂量范围内,射线对A549细胞的抑制率与剂量呈显著正相关(r=0.988,P<0.001)。2.集落形成实验结果发现最佳照射时间为36小时。单纯照射组、50gg/ml药物+照射组、100μg/ml药物+照射组的D0值分别为2.58Gy、2.47Gy、2.35GyDq值依次为3.14Gy、2.93Gy、2.60Gy。最终求得50μg/ml和100μg/ml甘露聚糖肽的SER(D0)分别为1.04和1.10,SER(Dq)分别为1.07和1.20。3.流式细胞术结果:细胞的凋亡率随着射线干预剂量的增强而增加,且同一剂量点,药物照射组细胞凋亡率较单纯照射组高。甘露聚糖肽作用于细胞后,G2/M期细胞比例有所增加,该制剂对放射引起的G2/M期阻滞有协同作用,而对S期无明显影响。4.免疫细胞化学结果显示:药物和射线干预后均可下调A549细胞内突变型p53的表达。与单纯照射组相比,药物照射组细胞的p53表达更低。结论:小剂量甘露聚糖肽序贯照射可以下调突变型p53基因在A549细胞中的表达并抑制细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期以及诱导细胞的凋亡。甘露聚糖肽对肺腺癌A549细胞具有一定程度的放射增敏效应。
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