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本研究在前期构建的欧洲葡萄‘无核白’胚珠cDNA文库的基础上,通过噬菌体侵染宿主菌XL1-Blue筛选阳性克隆后,以大肠杆菌BM25.8宿主菌进行培养,实现阳性克隆转换,对阳性克隆进行测序获得EST序列,并对特异序列进行鉴定,取得的主要结果如下:1.从欧洲葡萄‘无核白’胚珠cDNA文库中随机挑选了4800个克隆进行5’端测序,经剔除载体、污染序列和小于100 bp的序列后,共获得了3908条EST,这些序列登陆了NCBI GenBank数据库,这些序列及登陆号列入附录。2.对3908条EST聚类分析获得了3046个独立序列。这些独立序列对比拟南芥功能分类标准,共有2056个独立序列分为21类。其中与新陈代谢有关的有435个独立序列,能量有关的22个独立序列,储藏蛋白有关的6个,细胞周期和DNA加工有关的82个,翻译有关的110个,蛋白质合成有关的138个,蛋白质命运(折叠、修复、靶向运输)有关的183个,结合或辅助功能蛋白(结构的或催化的)有关的279个,新陈代谢调控和蛋白调控有关的11个,细胞运输、运输功能和运输路径有关的101个,细胞交谈/信号转导机制有关的10个,细胞自救、防御和抗病有关的39个,与环境间的相互作用有关的21个,系统与环境间的相互作用有关的1个,细胞命运有关的6个,系统发育有关的15个,细胞组分的生物进化有关的3个,器官分化有关的1个,亚细胞定位有关的158个,不明确的分类有关的126个,未获得分类的309个。3.进一步对获得的3046个独立序列与NCBI GenBank nr蛋白质数据库进行同源比对(E-value≤1e-5),共获得了69个与种子或胚发育相关的蛋白基因的独立序列,其中涉及与未受精胚囊蛋白基因(Unfertilized embryo sac)有关的独立序列3个,体细胞胚胎发生相关蛋白基因(Somatic embryogenesis related protein genes)有关的独立序列15个,胚发育缺陷蛋白基因(Embryo Defective genes)有关的独立序列17个,胚囊发育停止蛋白基因( Embryo sac development arrest genes)有关的独立序列7个,细胞程序性死亡(death-related protein gene)相关基因有关的独立序列6个,钙结合蛋白(Calcium-binding protein gene)相关基因有关的独立序列21个。4.从获得与细胞程序性死亡和钙结合蛋白相关的27个独立序列中分离了一个序列,该序列在无核与有核葡萄胚珠发育过程中表达差异显著。通过Race技术扩增,获得该序列全长为907 bp(登陆GenBank accession no. HQ214155),拥有2个EF-hand钙结合蛋白模体,简称之为VvCBP1基因,该基因序列与番茄同源基因的同源性为100%。利用VIGS技术在番茄中沉默VvCBP1的同源基因以间接验证VvCBP1的功能。研究结果表明,瞬时沉默番茄果实中种子数量明显减少。这个结果暗示,VvCBP1对番茄种子发育进程中有促使幼胚败育作用。