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目的:本文以甘蔗叶粗多糖为研究对象,探索其除蛋白、色素的纯化方法,并优选出最佳纯化工艺;摸索出甘蔗叶多糖的半纯品制备方法,并对甘蔗叶多糖半纯品的分离纯化方法进一步探索、研究,为深入研究甘蔗叶多糖的结构、单糖组成以及其产品的开发提供科学参考。 方法:采用L9(34)正交试验法优选甘蔗叶粗多糖除蛋白工艺以及脱色工艺。采用DEAE-纤维素离子交换树脂柱色谱、葡聚糖凝胶柱色谱等现代分离技术对甘蔗叶多糖进行分离纯化研究,利用高效凝胶渗透色谱法进行多糖纯度鉴定,并采用紫外光谱法及化学检识方法对其一般性质进行鉴定。 结果:甘蔗叶粗多糖最佳除蛋白工艺:Ⅱ型ZTC1+1天然澄清剂用量为6%/3%(B/A),温度为30℃,多糖溶液浓度为3%,处理时间为1/1(h/h)。最佳脱色工艺:AB-8大孔吸附树脂用量为1g/10ml粗多糖溶液,处理时间为4h,温度为50℃。采用DEAE-纤维素柱色谱对甘蔗叶多糖半纯品进行分离,依次用蒸馏水、0.05mol/L、0.1mol/L、0.3mol/L不同浓度的氯化钠溶液进行洗脱,苯酚-硫酸法跟踪检测。根据洗脱曲线所示,甘蔗叶多糖存在四个部位洗脱峰(GZY-Ⅰ,GZY-Ⅱ,GZY-Ⅲ,GZY-Ⅳ),且主要集中在蒸馏水洗脱部位,即GZY-Ⅰ。利用葡聚糖凝胶G-100对GZY-Ⅰ进行分离,发现GZY-Ⅰ存在两个分子量分布的多糖(GZY-Ⅰa,GZY-Ⅰb),收集GZY-Ⅰb,冷冻干燥,采用化学检识法、紫外光谱法对其定性鉴别,证明GZY-Ⅰb为多糖成分,且没有蛋白质、核酸和淀粉的存在。 结论:本研究所确定的甘蔗叶粗多糖除蛋白、脱色素工艺稳定、合理、可行。通过除蛋白、脱色素工艺处理后的多糖纯度较高,DEAE-纤维素柱色谱和葡聚糖凝胶柱色谱法能有效分离甘蔗叶多糖,且所得多糖纯度高,苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法检测均呈阳性反应,且无蛋白质、核酸、氨基酸、色素等残留。