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目的研究miRNA-146a在小鼠变态反应性结膜炎模型中的表达及意义,探讨miRNA-146a对变态反应性结膜炎的细胞免疫学调节机制,为临床变态反应性结膜炎的诊断和治疗提供新的策略。方法取BALB/c小鼠用豚草花粉(RW)刺激,建立变态反应性结膜炎模型。qRT-PCR检测miRNA-146a表达水平;结膜组织通过姬萨姆染色,计算嗜酸性细胞数量;ELISA法检测变应原特异性IgE抗体及细胞因子IL-5、IL-13水平;流式细胞仪检测CD4~+CD25~-Tcon细胞与CD4~+CD25~+Treg细胞数量。构建miRNA-146a过表达慢病毒载体,尾静脉注射入小鼠体内,观察miRNA-146a过表达是否能改善变态反应性结膜炎临床症状及各项免疫炎性指标。分离纯化小鼠脾细胞、Tcon细胞和Treg细胞,RW刺激诱发细胞变态反应,在细胞水平模拟变态反应性结膜炎;构建miRNA-146a模拟物、miRNA-146a抑制剂和miRNA-146a阴性对照核酸,并转染细胞;观察miRNA-146a不同表达水平对细胞增殖、细胞因子(IL-5、IL-13)水平及NF-κB炎症信号通路的影响。结果1.小鼠经RW致敏后,出现明显的变态反应性结膜炎症状,血清中RW特异性IgE水平上升;结膜组织有大量嗜酸性粒细胞浸润;脾脏中IL-5、IL-13表达增加,并且Tcon细胞过度增殖,比例明显升高,而Treg细胞比例则明显降低。此外,变态反应性结膜炎小鼠脾脏中miRNA-146a表达明显下调。小鼠尾静脉注射miRNA-146a慢病毒后,脾脏中miRNA-146a表达显著上调。miRNA-146a高表达可有效改善变态反应性结膜炎症状,降低血清中特异性IgE水平;结膜嗜酸性粒细胞浸润明显减轻;脾脏中IL-5、IL-13水平降低,并且Tcon细胞比例降低,Treg细胞比例升高。2.脾细胞经RW刺激72小时后,细胞增殖明显加速,IL-5和IL-13水平均显著提高。并且脾细胞以及分离纯化得到的Tcon细胞和Treg细胞中,miRNA-146a表达均明显下调。但转染了miRNA-146a模拟物的脾细胞则可对抗上述改变。野生型Treg细胞和Tcon细胞共培养,Treg细胞可明显抑制Tcon细胞的增殖。Tcon细胞转染miRNA-146a抑制剂后再与野生型Treg细胞共培养,Treg细胞对Tcon细胞的抑制作用明显减弱;但是,Tcon细胞转染miRNA-146a模拟物后再与野生型Treg细胞共培养,该抑制作用则明显增强。有趣地是,改变Treg细胞内miRNA-146a的表达水平,却对其抑制作用没有影响。进一步发现,Tcon细胞内miRNA-146a上调后,能抑制其靶分子TRAF6的表达,从而抑制NF-κB活性,降低IL-5、IL-13水平。但Tcon细胞内miRNA-146a下调后,TRAF6的表达增加,激活NF-κB,IL-5、IL-13生成增多;该作用可以被NF-κB特异性阻断剂Bay所取消。结论1.变态反应性结膜炎模型小鼠的脾脏内miRNA-146a表达明显下调;上调miRNA-146a表达可有效改善小鼠变态反应性结膜炎症状。2.CD4~+CD25~+Treg细胞对CD4~+CD25~-Tcon细胞的抑制作用受Tcon细胞内miRNA-146a水平的影响,两者呈正相关效应。3.变态反应性结膜炎Tcon细胞内miRNA-146a表达下调,NF-κB信号通路被激活,Tcon细胞内IL-5和IL-13水平升高。上调Tcon细胞内miRNA-146a表达,则可以抑制NF-κB的活化,减少细胞因子生成。