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目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布(Celecoxib)联合放射治疗对肺癌A549细胞生长增殖及凋亡的影响,并对其作用机制进行研究,为肺癌的联合治疗提供理论依据。方法(1)噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的塞来昔布对肺癌A549细胞生长增殖的影响;(2)噻唑蓝(MTT)比色法检测不同剂量的X射线对肺癌A549细胞生长增殖的影响;(3)依据(1)+(2)实验结果,选择合适的药物浓度(塞来昔布:200umol/L)及X射线剂量(6Gy);(4)MTT实验:实验分组:空白对照组(PBS组)、药物组(塞来昔布:200umol/L)、放射治疗组(6Gy)及联合治疗组(分三组:塞来昔布浓度分别为100umol/L,200umol/L,400umol/L,分别加上6Gy X射线剂量),实施干预后将细胞接种96孔培养板,连续观察4～6天,检测OD值,根据公式计算细胞生长抑制率(E):E =(1-实验组平均OD值/对照组平均OD值)×100%,并描绘出细胞生长抑制曲线;(5)激光共聚焦(LSCM)检测细胞凋亡改变:同上分组,实施干预后将细胞接种6孔培养板,48小时后固定细胞,对各组细胞进行核染色,并在激光共聚焦显微镜下观察各组细胞核形态学的变化;(6)流式细胞分析法(FCM)检测细胞周期和凋亡:同上分组,实施干预后将细胞接种6孔培养板,48小时收集细胞,PBS洗涤后,新鲜标本进行Annexin-FITC-PI双染检测凋亡,同时用70%乙醇固定细胞进行细胞周期检测。对各组细胞中G0/G1期、S期、G2/M期比例、凋亡率进行统计学分析;(7)RT-PCR检测COX-2mRNA的表达变化:同上分组,实施干预后将细胞接种6孔培养板,48小时收集细胞,PBS洗涤后,Trizol裂解细胞,逆转录合成cDNA,并使用RT-PCR进行检测各组细胞COX-2mRNA的表达。结果(1)塞来昔布对肺癌A549细胞有明显的生长增殖抑制作用,并且呈剂量和时间依赖性。(2)在一定照射剂量范围内,X射线对肺癌A549细胞的生长增殖有抑制作用。(3)与单纯药物组及放射治疗组比较,塞来昔布与X射线联用可明显增加对肺癌A549细胞生长增殖的抑制作用(P<0.05)。(4)塞来昔布与X射线联用明显促进肺癌A549细胞的凋亡,并可见凋亡小体形成。(5)各实验组均可抑制肺癌A549细胞生长增殖,联合组抑制作用更加显著,主要使细胞聚集在G0/G1期,S期和G2/M期细胞减少(P<0.05)。(6)除放疗组COX-2mRNA的表达增高外,其它实验组COX-2mRNA的表达均降低,联合组中COX-2mRNA的表达降低得更加明显。结论(1)COX-2抑制剂塞来昔布联合放射治疗对肺癌A549细胞有明显的生长增殖抑制作用,主要使细胞聚集在G0/G1期,抑制肺癌细胞生长增殖,增加细胞凋亡,并可见凋亡小体形成;(2)COX-2抑制剂塞来昔布联合放射治疗可下调放疗所致COX-2mRNA的高表达,从而抑制COX-2的促肺癌发生发展作用;(3)COX-2抑制剂塞来昔布对肺癌A549细胞有放射增敏作用,其机制可能与COX-2mRNA表达水平相关;(4)放射治疗联合COX-2抑制剂可能是临床放疗增效的一种新途径。