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背景和目的:希特林缺陷引起的新生儿肝内胆汁淤积症(Neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency,NICCD)是一种编码希特林蛋白的SLC25A13基因突变引起的孟德尔遗传病.SLC25A13基因分析是NICCD确诊必不可少的手段,但传统方法如高频突变筛查与DN A直接测序并不能检测出所有突变类型,尤其是隐匿性大片段插入或缺失.本研究目的在于研究3个希特林缺陷病家系的SLC25A13基因突变类型,为患者确诊提供分子依据. 对象和方法:以3个疑诊NICCD的患者及其父母为研究对象,以病例报告形式描述3个家系中NICCD患者临床表现、生化和代谢组学改变,及其临床结局.在传统SLC25A13基因分析基础上,分别从三位患者(编号分别为C0255、C0282和C0388)外周血淋巴细胞中提取总RNA,进行逆转录PCR(RT-PCR)合成cDNA后再通过巢式PCR扩增SLC25A13的cDNA编码区域,再运用cDNA克隆和测序分析,识别患者SLC25A13基因异常转录产物.必要时,进一步运用家系单核苷酸多态性(SNP)和半定量PCR等技术,精确定位并最终识别隐匿性突变. 结果:①C0255患者通过高频突变筛查只发现父源性突变c.851_854del4,cDNA克隆也只发现r.851_854del4的父源性转录子.然后,通过半定量PCR初步将母源性隐匿性突变定位于外显子1附近,并通过家系SNP分析进一步精确定位该突变.最后通过LA-PCR和直接测序,确定患者隐匿性突变为c.-3251_c.15+18443del21709bp.②C0282患者通过高频突变筛查只发现母源性突变IVS16ins3kb,而cDNA克隆发现父源性等位基因转录产物均具备r.329_468del(外显子5跳跃)特征,结合半定量PCR结果,将父源隐匿性突变初步定位于外显子5附近.在此基础上,通过LA-PCR和直接测序确定患者隐匿性突变为c.329-1687_c.468+3865del5692bp.③高频突变筛查和直接测序发现C0388患者为突变c.851_854del4纯合子,同时还携带一个新的突变IVS14+1G>A.该患者SLC25A13基因cDNA克隆结果证实,除了含r.851_854del的转录子,还检测到同时含r.851_854del和r.1312_1452del(外显子14跳跃)的转录产物.从而确定了IVS14+1G>A为剪接位点变异的性质,并明确了该患者SLC25A13基因型,确定了NICCD诊断. 结论:本研究通过cDNA克隆等方法,成功识别了2个新的大片段缺失突变c.-3251_c.15+18443del21709bp和c.329-1687_c.468+3865del5692bp和1个新的剪接位点变异IVS14+1G>A.以上发现为患者的确诊提供了可靠的实验依据,丰富了SLC25A13基因突变谱.本研究证实,外周血淋巴细胞SLC25A13基因cDNA克隆分析可为隐匿性突变的定位和剪接位点变异的定性提供重要线索,可作为部分NICCD患儿确诊的重要分子工具.