大青叶和杜仲叶生物活性物质的提取及纯化研究

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本文分为两大部分,第一部分是大青叶中靛蓝和靛玉红的提取及纯化研究;第二部分是杜仲叶中桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸的提取工艺优化研究。   靛蓝和靛玉红是存在于大青叶中的主要有效成分,属于生物碱类化合物。靛蓝主要用于食品、医药和日用化妆品的着色,其药理活性主要表现在保肝、抗菌消毒等;靛玉红具有抗菌抗炎、抗肿瘤、增强免疫力等生理活性。   桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸是传统名贵药材杜仲中的主要活性成分,属于环烯醚萜类化合物。具有清湿热、利便、保肝等药理作用,能明显抑制乙型肝炎DNA的复制,其苷元及有效多聚体是一种抗菌药物。   本文改进了大青叶中靛蓝和靛玉红的测定方法,获得了从大青叶中粗提靛蓝和靛玉红的最佳工艺条件。通过考察浸提法、微波萃取法、超声波法和加热回流法等提取方法,并利用高效液相色谱测定靛蓝和靛玉红的含量。结果表明,加热回流法在提取效果上具有明显的优势。以大青叶为原料,通过单因素和正交试验,获得提取靛蓝和靛玉红的最佳工艺条件为:80%甲醇溶液、水浴66℃、料液比1∶30、提取1.0 h、提取4次。靛蓝提取量为2.088 mg·g-1,含量为0.70%,靛玉红提取量为0.370 mg·g-1,含量为0.12%;经乙酸乙酯萃取后,粗产品中靛蓝的提取量为2.065 mg·g-1,含量上升为3.76%;靛玉红的提取量为0.364 mg·g-1,含量上升为0.66%。   建立了利用高速逆流色谱法分离纯化大青叶粗提物中靛蓝和靛玉红的方法。双相溶剂体系为正己烷∶乙酸乙酯∶乙醇∶水(1∶1∶1∶1,v/v),流动相流速为1.5 mL/min,转速为850r/min,柱温为30℃,检测波长为280 nm。一次进样粗提物54.9 mg,获得靛蓝纯品1.88mg,提取率为91.0%,纯度为98.4%;获得靛玉红纯品0.33 mg,提取率为90.7%,纯度为99.0%。提取的靛蓝和靛玉红分别通过紫外光谱、红外光谱、与标准品对照等手段进行了结构确认,为制备高纯度的靛蓝和靛玉红提供了一种快速、有效的方法。   研究了同时测定杜仲叶中桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸的方法,获得了从杜仲叶中粗提桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸的最佳工艺条件。通过考察浸提法、微波萃取法、超声波法和加热回流法等提取方法,并利用高效液相色谱测定桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸的含量。结果表明,加热回流法在提取效果上具有明显的优势。以杜仲叶为原料,通过单因素和正交试验,获得提取桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸的最佳工艺条件为:60%乙醇溶液、料液比1∶25、回流时间90 min、提取4次。桃叶珊瑚苷提取量为87.96μg·g-1,京尼平苷酸提取量为187.43μg·g-1。此工艺简单可行,是一条同时提取杜仲叶中桃叶珊瑚苷和京尼平苷酸的有效途径,为杜仲叶的深度开发与利用提供了工艺参数。
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