论文部分内容阅读
单抗药物由于其免疫原性小,副作用低,治疗效果显著等特点,被广泛运用于肿瘤、自身免疫性疾病、器官移植排斥、心血管疾病、感染等疾病的治疗。然而,单抗药物的生产及临床使用过程中,由于不同的理化因素而使单抗药物发生糖化修饰和氧化修饰,而这些翻译后修饰可能会导致其理化性质发生改变,最终影响产品的生物学功能。因此,研究单克隆抗体药物的糖化修饰和氧化修饰与其生物学功能之间的关系对单抗药物的工艺开发、制剂生产及质量控制具有重要的意义。本研究建立的糖化定量分析方法精密度好,两位实验员分别测定6份供试品溶液,其RSD值分别为0.5%、1.2%,12份的RSD值为0.9%;在糖化含量0.3125%～20%范围具有较好的线性,其线性相关系数r=0.9999,y轴截距的绝对值与100%浓度点糖化含量响应值的比值为0.7%;方法准确度良好,各水平的准确度测定溶液的回收率分别为分别为(95.9±1.355)%、(100.3±0.402)%、(102.0±0.336)%、(102.6±0.569)%、(103.7±1.000)%、(106.6±2.369)%、(108.6±1.212)%,且回收率的RSD值在0.3%～2.2%之间。本研究建立的重组人源化单克隆抗体药物氧化定量分析方法精密度好,两位实验员分别测定6份供试品溶液,其RSD值分别为0.9%、3.4%,12份的RSD值为2.5%,在氧化含量3.6%～28.4%之间具有良好的线性,其线性相关系数r=1.0000;y轴截距的绝对值与100%浓度点氧化含量响应值的比值为2.4%;方法的准确度好,各水平的准确度测定溶液的回收率分别为(100.8±0.413)%、(99.3±1.632)%、(98.4±0.721)%、(99.8±1.0)%,均在90%～110%之间,且回收率的RSD值在0.4%～1.6%之间。本研究建立的重组人源化单克隆抗体药物生物学活性分析方法专属性强,除了与VEGF-110和VEGF-121因子有剂量曲线关系,与VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、PLGF因子,抗TNF–α单抗药物和高温破坏的样品均无剂量曲线关系;方法的精密度好,两位试验员分别测定6份供试品溶液,其RSD分别为4.5%、3.0%,12份的RSD为6.4%;在66%～144%的线性范围内线性较好,线性相关系数r=0.9950,斜率为1.0973;方法的准确度好,各水平下的回收率在(106.00±3.46)%、(99.98±6.08)%、(102.27±1.53)%、(91.03±4.58)%、(99.52±5.86)%,回收率的RSD在1.7%～7.7%之间;并且该方法在细胞数目8000 cell/m L～12000 cell/m L、细胞代次4～11代,细胞批次均具有较好的耐用性。本研究分别比较商业化和自研的单抗药物在糖化含量、氧化含量及生物学活性差异,结果显示在糖化含量上自研略高于商业化单抗药物,而氧化含量与生物学活性两者相当。通过测定不同糖化含量及不同氧化含量的重组人源化单克隆抗体的生物学活性,建立糖化修饰与生物学功能的关系及氧化修饰与生物学功能的关系。结果显示,高含量的糖化修饰和高含量的氧化修饰均能使重组人源化单克隆抗体的生物学活性降低,特别是当糖化修饰增加到20.7%以上和氧化修饰增加到7.8%以上时,其生物学活性已经超出80%～125%的质控范围。