运用RT-PCR检测和区分猪传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒的研究

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caritasSD
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根据已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的基因组核苷酸序列,自行设计了一对跨幅约1.4kb的引物A<,1>/A<,2>,该区段包括S基因末端,ORF<,3>和ORF<,4>起始端,并同时参照国外已发表的两对引物B<,1>/B<,2>和C<,1>/C<,2>.采用异硫氰酸胍一步法和Silica吸附法提取核酸用该3对引物对TGEVMiller株、Purdue株和PRCV AR310株以及国内TGE疫苗株分别进行RT-PCR扩增,通过对RT-PCR扩增条件进行优化,结果均获得了与预期一致的PCR产物,根据引物C<,1>/C<,2>的PCR产物大小可以快速区分TGEV和PRCV.对猪轮状病毒、口蹄疫病毒和同属于冠状病毒科的鸡传染性支气管炎病毒用此方法扩增,结果均为阴性.建立的RT-PCR方法最高可检测出12PFU细胞毒的病毒量.
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