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目的获取青海高原地区结核病患者对结核治疗药物的耐药性,了解患者基本情况与耐药性的关系;对本地区结核菌株进行大片段多态性序列(large sequence polymorphisms,LSP;或称差异片段Regions of difference,RD)基因分型,并分析菌株耐药性与基因型是否相关;研究菌株磷脂酶C编码基因(phospholipase C,plc)的多态性及其与耐药水平的关系;同时探索RD和plc这两种大片段基因多态性之间是否存在联系。方法(1)收集青海地区可疑结核病患者痰样,经培养和鉴定后,刮取部分结核杆菌菌落,采用比例法药敏试验,检测菌株对常用结核治疗药物的耐药性。(2)煮沸法提集菌株样本DNA后,聚合酶链式反应(PCR)扩增结核菌基因组RD基因,对菌株进行RD基因分型。随机挑选部分菌株,对利福平、异烟肼热点耐药突变基因(rpoB、katG)进行测序,随后分析菌株比例法耐药结果及热点耐药基因(rpoB、katG)突变与RD基因型之间是否有关。(3)通过PCR检测结核杆菌的磷脂酶C编码基因,获得该基因的多态性特点。探索plc基因与菌株RD基因型、plc基因突变率与结核杆菌的耐药表型之间的关系。结果本研究所涉及细菌经鉴定后,确定为结核分枝杆菌的菌株共249株。(1)比例法药敏结果:249株结核分枝杆菌中,异烟肼耐药108株,利福平耐药93株,链霉素耐药97株,乙胺丁醇耐药70株,氧氟沙星耐药34株,卡那霉素耐药10株,其中耐多药、广泛耐药菌分别有79株、3株。(2)RD基因分型结果:青海地区的249株结核分枝杆菌中,北京家族株有190株,其中现代型172株,古代型18株;非北京家族株共59株,其中5株缺失RD239基因。感染患者最多的为RD150基因和RD142基因均存在的现代型北京家族株。本地区北京/非北京家族菌株与表型药敏结果和katG、rpoB基因突变无关,而现代型北京家族株较古代型更易获得对至少一种一线药物耐药的特性。(3)plc基因多态性结果:本地区结核菌株的plc基因呈多态性,其中plcD基因突变率最高达97.19%,大多数菌株的plcABCD基因型为+++-(+:野生型;-:突变型),与标准株H37Rv一致。结合RD分型结果来看,菌株基因型(北京/非北京家族)与plcABC基因突变存在联系,而与plcD基因突变无关。本研究显示,除plcC基因突变与EMB的表型耐药结果间存在联系,其他plc基因均未发现与耐药及MDR有关。结论青海省主要流行现代型北京家族结核菌,且耐药情况较严峻;结核杆菌RD基因分型结果与其表型耐药和热点耐药基因突变均无关联;菌株plc基因具有多态性,但该基因突变与菌株耐药性基本无关;非北京家族菌株plcABC基因突变率相对高于北京家族株,而plcD基因突变率在北京/非北京家族株间无差异,因此推测plcABC基因的完整性可能与北京家族菌株的毒力存在一定联系。