【摘 要】
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本研究利用dsKNA技术,从平菇天达300菌丝体中提取出平菇dsRNA病毒的基因组,共有4个片段,大小分别为8.2kb,2.6kbp,2.0kbp,1.1kbp(根据BioCaptMW软件计算);酶切验证4个片段均为
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本研究利用dsKNA技术,从平菇天达300菌丝体中提取出平菇dsRNA病毒的基因组,共有4个片段,大小分别为8.2kb,2.6kbp,2.0kbp,1.1kbp(根据BioCaptMW软件计算);酶切验证4个片段均为dsRNA,其中8kbp为doublet。利用一步RT-PCR对dsRNA病毒的部分基因组进行了克隆、测序,从8.2kb、2.6kb中扩增出的目的片段,大小分别为为556bp和351bp,经过blast、保守序列比对分析,来自2.6kp的556bp序列与Pleurotus ostreatus virusⅠ(PoVⅠ)编码的RdRp基因有很高的相似性,核苷酸的相似性为86%,翻译为蛋白质的相似性为94%,其中10个不同的氨基酸中有9个不在RdRp保守区域内,只有一个在V保守区。在这10个氨基酸中,有7个是保守替代残基。因此2.6kb序列编码RdRp与双分体基因组分病毒科(Partitiviridae)的成员相似,提取的dsRNA病毒可能属于双分体基因组病毒科(Partitiviridae)。通过CsCl梯度离心,提取到两种大小、形状不同的病毒颗粒:直径为27~28nm,形状为等轴状;直径为22~24nm,形状为球形颗粒。平菇直径22~24nm球形颗粒病毒属首次报道。采用高温33℃培养重复切取尖端菌丝的方法对平菇天达300进行脱毒,结果表明,脱毒菌株日平均生长速度是出发菌株的1.2倍,摇瓶培养菌丝生物量显著提高,是出发菌株的2.8倍。脱毒菌株第一茬菇产量与出发菌株基本相同,第二茬菇产量比出发菌株提高10.9%。脱毒菌株子实体形状与出发菌株相比有明显改观,菇盖宽大,平均宽度为13cm,长度为8cm,子实体肥厚,外观整齐、白洁,而出发菌株菇盖较小,平均宽度为10cm,长度为6cm,子实体较薄,外观有些散乱,大小不均一。
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