硬孔灵芝化学成分及多糖的体外抗氧化活性研究

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硬孔灵芝为多孔菌科真菌硬孔灵芝Ganoderma duropora Lloyd的干燥子实体。分布于我国福建、广东、海南、广西、贵州等地区。我省硬孔灵芝资源丰富,并在市场上广泛流通和使用。本研究对硬孔灵芝三萜酸和多糖的热回流提取方法进行了优化。单因素实验考察三萜酸的提取溶剂乙醇的浓度及碱萃取试剂,结果发现95%乙醇及4%氢氧化钾为提取三萜酸的最优浓度及碱萃取试剂。采用正交设计法对料液比、提取温度、提取次数、提取时间4个因素,每个因素3水平进行优选,结果表明三萜酸的最佳提取工艺为:提取温度为60℃,提取次数3次,料液比:1:25,每次提取时间2h;多糖的最佳提取工艺为:提取温度70℃,提取次数3次,料液比1:40,每次提取时间1h。在上述最佳提取工艺条件下,我们对不同采收期硬孔灵芝三萜酸及多糖的含量进行了测定。结果表明,不同采收期(早季、晚季、第三季)硬孔灵芝三萜酸含量分别为:1.98±0.01、2.10±0.04、0.70±0.01mg/g;多糖的含量分别为:1.25±0.03,1.57±0.02,1.25±0.01mg/g。由此可见,晚季硬孔灵芝三萜酸和多糖的含量均最高,为硬孔灵芝的采收季节选择提供依据。在相同测定条件下,不同采收期硬孔灵芝总三萜酸提取物的液相色谱图,与中药指纹图谱软件生成的对照图谱相比,相似度分别为:0.896,0.9,0.834。以甘露糖、核糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖为混合标准品,不同采收期硬孔灵芝多糖经酸水解及柱前衍生化,在同等条件下,进行液相分析,结果表明,早期硬孔灵芝多糖主要含:甘露糖,葡萄糖.半乳糖,岩藻糖等4种单糖;晚季样品中主要含甘露糖、核糖、葡萄糖、半乳糖、木糖和岩藻糖;第三季样品中主要含有甘露糖、核糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖。由以上可知,不同采收期硬孔灵芝的总三萜酸含量及其指纹图谱存在差异,而且其多糖含量及单糖组成也有差别。灵芝多糖具有抗氧化作用。通过体外抗氧化清除白由基DPPH·,清除ABTS自由基,清除超氧阴离子由基和还原力4个模型,考察不同采收期硬孔灵芝多糖的抗氧化活性。早季、晚季及第三季的多糖清除DPPH自由基的IC5o分别为:99.05,86.83,101.06ug/mL;清除ABTS自由基的分别为:1.39,0.93,1.57mg/mL;清除超氧阴离子自由基的分别为:0.52,0.27,0.38mg/mL。通过统计学分析,结果表明,硬孔灵芝多糖具有一定的抗氧化作用;晚季硬孔灵芝多糖的抗氧化能力显著高于早季及笫三季,早季与第三季的抗氧化活性无显著差异。不同采收期对硬孔灵芝多糖的抗氧化活性有影响。本文从硬孔灵芝醇提物的乙酸乙酯部位中分到9个单体,其中7个首次从硬孔灵芝中分得。此外,通过分析发现不同采收期硬孔灵芝子实体的氨丛酸含量及其高效离子交换色谱图也存在一定的差异,可以作为品质评价的指标之总之,当前对于硬孔灵芝的化学成分及其抗氧化活性研究报道较少,有关硬孔灵芝的化学成分及其生物活性等值得深入研究。
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