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目的采用多种方法检测非小细胞肺癌(NSCLC)中四种驱动基因EGFR、KRAS、EML4-ALK和c-Met的突变情况,分析其与临床病理特征、标本类型和检测方法的关系以及各驱动基因之间的相关性,从而指导临床实践中的基因检测和靶向用药。方法收集1144例临床标本包括石蜡切片、胸腹腔积液及心包积液,采用直接测序法、ARMS法及HRM法检测EGFR基因突变情况;直接测序法检测KRAS基因突变情况;qRT-PCR法检测EML4-ALK基因融合情况;FISH检测c-Met基因扩增情况,qRT-PCR检测c-Met基因表达量,并分析EGFR、KRAS、EML4-ALK和c-Met基因与临床特征、病理类型、标本类型、检测方法的关系及探究各驱动基因之间的相关性。结果1.1144例NSCLC中EGFR总突变率为45.10%,敏感型突变率为40.47%,好发于非吸烟、女性、腺癌患者(P<0.05),腺癌中占47.94%;对于鳞癌,女性的EGFR敏感型突变率显著高于男性(36.84%vs.16.67%,P=0.043);手术标本中EGFR突变的检出率显著高于活检标本(47.92%vs.41.46%,P=0.041);用直接测序法、ARMS法和HRM法三种方法检测手术标本中EGFR基因突变检出率基本相似,而在活检标本中直接测序法的EGFR突变检出率显著高于ARMS法(P=0.037),在胸腔积液中ARMS法显著高于直接测序法(P=0.027);采用不同方法检测同一批标本发现,ARMS和直接测序法检测EGFR突变的一致率为73.68%,HRM法和直接测序法检测的一致率达78.67%。2.1144例标本中同时检测KRAS基因的有159例,KRAS突变率为6.92%(11/159);有2例标本同时存在KRAS和EGFR基因突变,EGFR与KRAS双驱动的发生率1.26%。3.1144例标本中同时检测EML4-ALK基因的有221例,EML4-ALK融合基因阳性率为19.91%(44/221);有14例标本同时存在EML4-ALK融合和EGFR突变;EGFR与EML4-ALK双驱动的发生率为6.33%;相对于EGFR突变型患者,EML4-ALK基因融合更好发于EGFR野生型NSCLC中(21.13%vs.17.72%),尤其是女性患者(P=0.035)。4.NSCLC中同时检测四种基因的有108例,其中c-Met基因扩增率为1.85%,2例c-Met扩增阳性患者的EGFR、KRAS基因突变及EML4-ALK融合基因检测均为阴性。2例存在c-Met基因扩增(FISH法)的患者也同时存在c-Met基因mRNA水平的高表达(qRT-PCR法),其他未扩增者的c-Met基因表达也相对较低。结论1.本研究分析发现EGFR敏感型突变好发于非吸烟的女性腺癌患者,KRAS基因突变在年轻、吸烟、男性、腺癌患者中较为多见,EML4-ALK基因融合在年轻、非吸烟、女性、腺癌患者中较为多见。2.非吸烟的女性鳞癌患者或小活检鳞癌标本也应当纳入EGFR突变检测的行列中。3.NSCLC中驱动基因的异常在多种组织学或细胞学标本中均能成功检测到,手术标本的检出率显著高于活检标本。4.直接测序法、ARMS法和HRM法三种方法在不同标本类型中的EGFR突变检出率具有差异性。5.EGFR与KRAS双驱动的发生率1.26%,EGFR与EML4-ALK双驱动的发生率为6.33%。6.c-Met基因扩增与c-Met mRNA水平高表达的检测一致率达66.67%。7.c-Met扩增与EGFR、KRAS突变及EML4-ALK融合之间是不共存的。