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本研究以毛叶枣(ZizyphusmauritfanaLam)为试材,初步摸索了花药、胚乳培养中低温预处理,植物生长调节剂种类及配比,蔗糖浓度,有机附加物种类及浓度等方面的作用与影响;探索了毛叶枣胚状体发育转株的模式及相应的培养基配方,进而实现了胚状体的正常转株。研究取得的主要结果如下:
1.花药愈伤组织的诱导及继代增殖
适合于花药愈伤组织诱导的培养基是MS+2,4-D1.0m~L+6.:BA0.1mg/L,适合于花药愈伤组织继代增殖的培养基为MS-~2,4-D0.5mg/L+6-BA0.25mg/L。2,4-D在花药愈伤组织诱导及继代增殖方面都有重要的作用。
2.低温预处理对花药愈伤诱导的作用
适当的低温预处理能有效提高毛叶枣“留香”品种花药愈伤组织的诱导率,在4℃低温3天、5天、7天三种处理中,以处理3天的效果最佳,出愈率达40%,其它两个分别为4.9%和2.1%,对照(不经低温预处理)为2.9%。
3.培养基中高浓度蔗糖可以减轻继代培养中花药愈伤组织的褐变现象,并在一定程度上改善花药愈伤组织的质地,使其保持致密的结构。
4.胚乳愈伤组织的诱导及其再分化
适合于毛叶枣“.高朗一号”品种胚乳愈伤组织诱导的培养基配方是MS+2.4-D0.5mg/L+NAA0.5mg/L(或KT0.5mga,)+CH500mg/L,而MS+CH500mg/L是适合于该胚乳愈伤组织继代增殖的配方。
适合于毛叶枣“留香”品种胚乳愈伤组织诱导的培养基配方是MS+2.4-D1.0mpdL+NAAl.0mg/L~在MS+2.4-D0.5medt+NAA0.5mg/L+CH500mg/L+CWlO%(体积比)的培养基上,该胚乳愈伤组织能够旺盛地增殖并能分化出不定芽和不定根。
5.毛叶枣幼胚胚状体的转株是按先长根后长芽的方式进行的。在MS+TDZ0.05mg/L+多效唑0.5rog/L+硝酸银10mg/L+Vcl00rog/L+活性炭3ffL培养基上,经过多次继代(10代以上)培养的胚状体可在次生胚状体基部长出白色细长的根,将此生根胚状体转入MS+ZT0.5medt,+CH500mgm+蔗糖40g/L培养基上,能够继续分化出顶芽和真叶,进而形成完整的小苗。