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研究背景胰腺癌是常见的消化系统恶性肿瘤,其早期诊断困难,预后较差,目前没有比较理想的治疗方法。最近有报道在肝癌中发现蛋白质组氨酸磷酸酶LHPP为肿瘤抑制因子,在宫颈癌、膀胱癌和黑色素瘤中也相继研究发现LHPP对肿瘤有抑制效果。迄今为止,还没有关于LHPP与胰腺癌关系的研究,其抗肿瘤作用机制尚不清楚。本文主要阐述了LHPP在胰腺癌细胞中增殖、迁移侵袭及促凋亡的作用,并对其机制进行了初步探究,旨在为胰腺癌的治疗提供新的治疗思路。方法1.用免疫组化检测胰腺癌及癌旁组织LHPP的表达情况,western blotting和q-PCR检测胰腺癌Bx PC-3、As PC-1细胞株和HPDE6-C7正常胰腺导管细胞株LHPP的表达差异。2.通过体外构建LHPP基因慢病毒载体,并感染胰腺癌Bx PC-3和As PC-1细胞株。用CCK-8试剂及克隆形成实验检测LHPP对胰腺癌细胞增殖的影响,利用Transwell小室实验检测LHPP对胰腺癌细胞迁移侵袭能力的影响。3.使用定量RT-q PCR分析Vector、LHPP、NC、sh LHPP组中的snail、L1CAM、laminin-5、fibronectin、N-cadherin和vimentin m RNA的表达情况;western blotting检测Vector、LHPP、NC、sh LHPP四组细胞的PTEN和磷酸化AKT以及总AKT的蛋白表达水平,并且用AKT激活剂SC79刺激LHPP组,进一步检测磷酸化AKT和总AKT的蛋白表达水平。4.western blotting和流式细胞仪检测胰腺癌细胞凋亡与LHPP的关系;并且用AKT激活剂SC79刺激LHPP组,进一步检测cleaved-Caspase-3及cleaved-PARP的蛋白表达水平。结果1.LHPP在胰腺癌组织和细胞中的表达情况分别取胰腺癌和其癌旁组织各36例,免疫组织化学分析结果显示:胰腺癌组织中LHPP的表达显著低于癌旁组织,（P<0.05）。此外,胰腺癌Bx PC-3和As PC-1细胞株的LHPP蛋白和m RNA表达水平明显低于HPDE6-C7胰腺导管正常细胞（P<0.05）。2.LHPP对胰腺癌细胞株的增殖及迁移侵袭能力的影响在胰腺癌细胞株中:CCK-8增殖实验提示LHPP组的增殖能力低于Vector组,96小时的OD值显著低于后者（p<0.01）;sh LHPP组的增殖能力高于NC组,96小时OD值显著高于后者（p<0.01）。克隆形成实验中,LHPP组所形成的细胞克隆计数显著低于Vector组;sh LHPP组形成的细胞克隆计数显著多于NC组。Transwell迁移侵袭实验中,LHPP组的穿膜细胞计数显著低于Vector组（P<0.05）;sh LHPP组的穿膜细胞计数显著多于NC组（P<0.05）。这些结果表明LHPP具有抑制胰腺癌细胞株的增殖及迁移侵袭的作用。3.LHPP与胰腺癌细胞生长、迁移侵袭的相关机制研究在胰腺癌细胞株中,LHPP组的定量q-PCR结果为snail,laminin-5,L1CAM,N-cadherin和vimentin的m RNA表达水平降低,而在sh LHPP组的结果则相反;western blotting结果显示:LHPP组的PTEN蛋白的表达明显高于Vector组,sh LHPP组PTEN蛋白的表达低于NC组（P<0.05）;对于磷酸化AKT的表达,LHPP组的表达明显低于Vector组,sh LHPP组高于NC组（P<0.05）,总AKT蛋白的表达在四组中无明显变化;在胰腺癌细胞株的LHPP组中加入SC79（AKT激活剂）预处理后,磷酸化AKT表达明显高于LHPP组（P<0.05）,总AKT的蛋白表达无明显变化。4.LHPP对胰腺癌细胞凋亡的影响流式细胞术检测发现LHPP组比Vector组凋亡细胞比例显著增加（p<0.05）,sh LHPP组比NC组凋亡比例减少（p<0.05）。与上述结果一致的是,western blot检测发现LHPP组的凋亡蛋白cleaved-Caspase-3及cleaved-PARP表达水平明显高于Vector组（p<0.05）,而在sh LHPP组中表达明显减少（p<0.05）。在Bx PC-3和As PC-1细胞株的LHPP组中加入SC79预处理后,cleaved-Caspase-3和cleaved-PARP凋亡蛋白表达低于LHPP组（P<0.05）。这些结果表明,LHPP可促进胰腺癌细胞的凋亡。结论1.LHPP在胰腺癌组织中的表达显著低于癌旁组织,且LHPP在胰腺癌细胞Bx PC-3和As PC-1中的表达也显著低于HPDE6-C7正常胰腺导管细胞。2.LHPP通过干扰AKT信号通路,抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移侵袭。3.LHPP通过抑制c IAP1和促进cleaved-Casp-3、cleaved-PARP蛋白表达,促进胰腺癌细胞的凋亡。4.SC79降低LHPP对磷酸化AKT的抑制作用,且减弱LHPP对cleaved-Casp3、cleaved-PARP蛋白的促进作用