青岛沿海海藻次级代谢产物及其生物活性筛选的初步研究

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我国海洋资源丰富,大型海藻分布广泛,由于其特殊的生长环境,代谢产物丰富,结构独特,引起了国内外科学家的重视和关注,从而加大了对海藻资源的开发和利用。植物病原菌是农业发展的一大严重威胁。农药的大量使用,不仅对生态环境造成极大伤害,而且也会使植物病原菌的抗药性和耐药性大大增强,药效明显减弱。然而新化学农药的开发费用高,农药残留问题严重,因此寻找一种新型环保的农药迫在眉睫。此外,细菌对海产养殖业的发展和海洋设备的污损都存在较大的影响,因此寻找天然抑菌活性物质是保护海洋环境,发展海产养殖业和海洋防污的重点。因海藻独特和新颖的代谢产物能够为其提供良好的结构模板,合理的开发和利用海藻资源具有极其重要的意义。本课题主要利用青岛沿海收集的多管藻、粗枝软骨藻、蜈蚣藻、海头红四株海藻为研究对象,通过对其运用有机溶剂浸提、液液萃取、梯度洗脱、薄板层析等方法初步处理后,得到不同极性的次级代谢产物,并对这些次级代谢产物进行4株细菌和4株植物病原菌的抑菌活性初步筛选实验。此外,通过抑菌活性大小的对比,对抑菌活性效果较好的海藻粗提物进行色谱分离纯化和现代波谱分析,对部分次级代谢产物进行分离纯化。实验结果发现:1、四种海藻的粗提物及次级代谢产物的抑菌活性研究:收集青岛沿海的四种大型海藻,干燥、粉碎、过筛、乙醇浸提、超声提取后获得紫黑色浸膏,再分别用石油醚和乙酸乙酯先后对浸膏进行液-液萃取,获得的乙酸乙酯相样品再通过石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲醇等进行梯度洗脱,并对每个海藻的各个组分进行HPLC检测和抑菌活性的筛选。综合薄层分析和抑菌活性的试验,发现多管藻为优势藻种,次级代谢产物丰富,抑菌活性较其他三个海藻有明显优势。2、四种海藻各梯度洗脱组分的生物活性筛选:在抑制4种细菌活性的实验中,阳性对照为氯霉素,四种海藻同样也表现出了一定的抑菌活性。粗枝软骨藻的Fr5对SA(金黄色葡萄球菌)的抑制效果较好(抑菌圈为16.2mm,阳性对照为29.2mm)。多管藻的抑菌活性最明显,中极性组分Fr5、Fr6、Fr7都有效果较好的抑菌活性,抑菌圈大小分别为:BS(枯草芽孢杆菌)12.3mm、15.0mm、15.2mm(阳性对照28.3mm),SA(金黄色葡萄球菌)11.2mm、12.3mm、14.2mm(阳性对照29.2mm),BT(苏云芽孢杆菌)9.1mm、11.5mm、8.6mm(阳性对照30.6mm),EC(大肠埃希氏杆菌)8.8mm、9.2mm、14.2mm(阳性对照30.3mm)。由此可见,多管藻抑菌效果最好,易于采集。综上所述,以多管藻为研究对象,并对其分离纯化。通过对大量多管藻进行粗处理后,发现中极性组分Fr4的抑菌活性最好,因此选择Fr4对其进行化合物的分离纯化。利用各种色谱分离纯化方法和现代波谱技术,从多管藻Fr4组分中共分离出了8个化合物。
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