甘肃牧区产脂肪酶微生物的筛选、培养条件和酶学性质的研究

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脂肪酶(lipase,EC3.1.1.3)全称甘油三酯水解酶,是一类重要的甘油酯键水解酶,能够在油水界面催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油,也可催化合成脂类化合物酯交换。因此,脂肪酶在食品、制药、皮革生产、洗涤剂、造纸、环保等许多工业领域中均有广泛的应用。近年来,微生物脂肪酶以其独特的优势成为人们关注的热点,已在工业中得到越来越广泛的应用。本研究从甘肃省天祝、甘南牧区的牦牛乳酥油、曲拉及牦牛生活环境的土样中筛选产脂肪酶微生物,对复筛得到的一株高产脂肪酶菌株进行鉴定,并对其产酶条件、分离纯化条件和酶学性质进行了研究。结果表明:1.从采集的样品中共筛选得到10株产脂肪酶微生物,复筛结果显示,菌株S122产脂肪酶活力较高(39U/mL);菌株S122菌落呈圆形平面扩散,乳白色,短绒状或近于粉状;显微镜下观察,菌体分支,成单个或链状的节孢子,节孢子呈长筒形或方形,也有椭圆或圆形;根据《真菌鉴定手册》进行形态学鉴定并经26S rDNA分子鉴定,其为地霉属(Geotrichum LK.),命名为Geotrichum sp. S122。2.采用单因素试验对菌株Geotrichum sp. S122的产酶条件:温度、接种量、装液量、摇床转速、发酵周期和培养基初始pH值进行了研究;采用Plackett-Barman和CCD试验设计优化产脂肪酶培养基。结果表明:Geotrichum sp. S122最佳的产酶培养基为:蔗糖35.54g/L,蛋白胨30.00g/L,尿素5.00g/L,硫酸镁1.00g/L,硫酸锌0.50g/L,硫酸亚铁0.50g/L,硫酸锰1.02g/L,氯化钙1.00g/L,磷酸氢二钾5.00g/L;最适发酵条件为:培养基初始pH值8.0,培养温度28℃,接种量4%,装液量60mL/250mL,摇床转速200r/min,发酵周期96h。3.采用双水相(ATP)萃取法对Geotrichum sp.S122脂肪酶进行分离纯化试验结果表明,双水相体系中PEG浓度10%,(NH4)2SO4浓度10%,NaCI浓度2%,pH值5.0时萃取效果最好,酶活收率达78%。4.对Geotrichum sp.S122脂肪酶酶学性质研究表明,最适作用温度为30℃,最适pH值为10.0;该酶在30和40℃下处理时,酶活损失率不大,在50和60℃下处理时,酶活损失率较大;pH值在8~11酶活最为稳定,说明此酶属于中温碱性脂肪酶;K+、Na+、Zn2+、Ca2+、Fe2+和Mn2+对酶有不同程度的抑制作用,Zn2+抑制作用最强,而Mg2+离子对酶具有激活作用。
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