【摘 要】
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哺乳动物合子基因组激活和植入前胚胎特异性表达基因的研究一直是发育生物学研究的重点。本研究在常规的DDRT-PCR基础上,成功的建立了单个植入前胚胎的mRNA差异显示技术系统,以
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哺乳动物合子基因组激活和植入前胚胎特异性表达基因的研究一直是发育生物学研究的重点。本研究在常规的DDRT-PCR基础上,成功的建立了单个植入前胚胎的mRNA差异显示技术系统,以小鼠植入前各期胚胎为材料,用3套优化的锚定引物进行mRNA差异比较,获得了29个差异片段。经GeneBankBLAST检索对这些片段所代表的基因进行分析,经反向Northern杂交确定12个是阳性差异。mRNA差别显示方法所获得的片段较短(100-500bp),我们用改进的方法成功地构建了小鼠单个成熟卵细胞、受精卵、2-细胞、4-细胞和8-细胞胚胎cDNA文库(滴度分别为:6.2×105、8.3×105、1.04×106、1.5l×106和1.62×106。平均插入片段约1kb),为进一步分离到这些差异片段的cDNA全长提供了条件。从成熟卵细胞、受精卵、2-细胞和4-细胞胚胎差别显示结果中,选择出三个比较有意义的特异表达的基因片段进行开发阅读框(ORF)、氨基酸序列和功能预测。
目前已经找到一个2、4-细胞胚胎特异表达的基因片段,分析结果表明与丝裂原活化蛋白激酶5(MAPKS)有95%的同源性,丝裂原活化蛋白激酶主要是通过对F-actin肌动蛋白的调控实现对鼠类早期胚胎发育过程中有丝分裂的调控作用的,和小鼠胚胎发育过程中发生的细胞周期转变有关,此基因可能在小鼠胚胎通过2-细胞阻滞,由细胞质调控向核调控转变过程中发挥重要作用。
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