黄曲霉产生的一类致癌物黄曲霉毒素AFB1严重危害人畜健康。由于缺乏高效的遗传学研究方法,目前人们对黄曲霉菌致病产毒的机制还了解得较少。本研究旨在对农杆菌介导黄曲霉遗传转化体系进行优化,建立高通量的阳性转化子鉴定方法,构建黄曲霉的T-DNA随机插入突变体库。主要研究结果如下:1.以黄曲霉单核分生孢子为转化受体,可明显提高转化率。2.PgpdA较PtrpC启动子更为有效地启动抗性基因ble在黄曲霉中的表达。3.建立稳定高效遗传转化体系:1×10⁶个/mL黄曲霉孢子与OD₆₀₀=0.3的农杆菌混合,22℃共培养48h;MM培养基（含100μg/mL博来霉素）进行抗性筛选。转化率约60个转化子/10⁶个孢子,PCR及Southern杂交表明,T-DNA已整合到黄曲霉基因组中,并稳定表达。4.建立高通量筛选鉴定方法:为简化阳性转化子的筛选鉴定,构建了含gfp的两种表达载体,即ble和gfp非融合表达载体pDHB/G和ble-gfp融合表达载体pDHBG;转化子经荧光检测、In-gel荧光分析、Western blot杂交和遗传稳定性分析表明,GFP在两种转化子中均可正常稳定表达;但融合表达的转化率高于非融合表达。表明ble-gfp融合表达载体pDHBG更适于黄曲霉菌遗传转化。5.突变体筛选及T-DNA插入位点分析。建立小型T-DNA插入突变体库（约1000个转化子）;经表型筛选鉴定,获得与生长、产孢、产毒、致病相关的突变株;通过TAIL-PCR,初步获得部分突变体T-DNA插入位点,为后续黄曲霉致病产毒相关功能基因的分析奠定了基础。