论文部分内容阅读
目的：了解天津地区多重耐药鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药性及耐药模式；分析多重耐药鲍曼不动杆菌p-内酰胺酶的产生及耐药基因和整合子分布情况；检测与插入序列ISAbal有关的OXA-23mRNA在8株亚胺培南耐药株中的表达情况；掌握多重耐药临床分离株分子流行病学情况。方法：收集2007年2月至2008年2月天津市六所三级甲等医院临床分离的78株鲍曼不动杆菌,用K-B法和微量肉汤稀释法对所有菌株进行药敏试验,筛选出多重耐药株。应用三维试验法对多重耐药株进行ESBLs,AmpC酶表型的筛选,应用双纸片增效法对亚胺培南耐药株进行金属酶表型筛选,并以PCR方法的对相关耐药基因进行扩增。应用实时荧光PCR的方法对8株亚胺培南耐药株OXA-23mRNA的表达进行检测,同时对8株菌进行插入序列ISAba1的扩增。以PCR的方法检测多重耐药株的三类整合酶基因,并用RFLP (restriction fragment length polymorphism)-PCR的方法分析整合子可变区基因盒结构。根据实验结果,抽取阳性PCR产物若干个进行测序,测序结果在genbank上进行同源性分析。以多基因聚类分析的方法对多重耐药株进行菌株亲缘性分析。结果：从78株临床分离菌中共筛选出55株多重耐药株,共形成22种耐药模式,其中9种较为常见。三维试验结果表明有7株产ESBLs,39株产AmpC酶,其中有4株同时表现为ESBLs阳性,8株亚胺培南耐药株中有4株金属酶表型阳性。PCR结果显示55株多重耐药鲍曼不动杆菌中有12株产TEM型p-内酰胺酶,5株产PER型β-内酰胺酶,1株产VEB-1型β-内酰胺酶,2株产IMP-1型金属酶,3株产IMP-2型金属酶,10株产OXA-23型碳青霉烯酶,未检测到SHV、CTX-M-1组、VIM-2、OXA-24群β-内酰胺酶。实时荧光PCR结果显示,8株亚胺培南耐药株中3株菌OXA-23mRNA表达升高,另5株菌OXA-23mRNA表达减低,所有菌株以PCR的方法均检测出插入序列ISAba1。PCR结果显示,55株多重耐药株中有47株菌含有Ⅰ类整合酶基因,其中有23株检出含有可变区结构,可变区PCR产物有2个片段长度：1500bp(4株)和2000bp(19株)RFLP结果显示1500bp可变区具有相同的DNA序列,2000bp可变区也具有相同的DNA序列,未检出Ⅱ、Ⅲ类整合酶基因。多基因聚类分析结果表明55株多重耐药鲍曼不动杆菌共含有3个克隆株。结论：55株多重耐药鲍曼不动感菌对亚胺培南敏感性最高,敏感率为85.5%;β-内酰胺酶的产生以AmpC酶为主,有39株菌(70.9%)产生该酶;插入序列ISAbal的碱基突变可能在一定程度上可能影响了OXA-23mRNA的农达；Ⅰ类整合酶基因在多重耐药株中分布广泛;多重耐药鲍曼不动杆菌村中不同医院间的交叉感染。