基于“以络论治”金纳多对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

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目的:本项实验研究是基于“以络论治”,以中医络病理论为基础,通过活血通络中药改善兔心肌缺血再灌注损伤的心肌梗死面积和无复流面积,并通过酶学、细胞凋亡指数和基因表达等方面初步探讨金纳多对心肌缺血再灌注损伤心肌保护作用的机理,同时为络病的治疗提供科学理论依据。材料与方法:将50只新西兰大耳白兔随机分为5组,每组10只,分别为①假手术组②模型组③金纳多A组50mg/kg④金纳多B组100mg/kg⑤硝酸甘油对照组。结扎左心室前降支90min后再灌注120min,制作兔心肌缺血再灌注损伤的模型。①假手术组完成全部实验操作,只穿线不结扎冠状动脉;②模型组按0.3ml/kg/min静脉滴注生理盐水;③组和④组按上述剂量按0.3ml/kg/min静脉滴注金纳多;⑤组按0.1ml/kg/min静脉滴注硝酸甘油,持续灌注180min后停止。实验结束后从颈静脉采血5ml检测cTnT和hs-CRP的含量;将左心室切片检测心肌无复流面积和心肌梗死面积;将未染色的心肌组织处理后在光镜下观察心肌细胞凋亡指数;将右心耳的组织通过逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)的方法测定心肌组织cPLA2-γ基因表达水平。结果1.金纳多A组、金纳多B组和硝酸甘油组与模型组相比较,NRA/LVA和MIA/LVA显著减小(P<0.01);硝酸甘油组与金纳多A组B组相比较,差异无统计学意义(P>0.05);金纳多B组与A组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2.模型组与假手术组相比较,cTnT和hs-CRP的含量显著升高(P<0.01),金纳多A组、B组和硝酸甘油组与模型组比较,cTnT和hs-CRP的含量显著降低(P<0.01);硝酸甘油组与金纳多A组B组相比较,差异无统计学意义(P>0.05);金纳多B组与A组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3.模型组与假手术组相比较,心肌凋亡细胞数显著升高(P<0.01),金纳多A组、B组和硝酸甘油组与模型组比较,心肌凋亡细胞数显著降低(P<0.01);硝酸甘油组与金纳多A组B组相比较,差异无统计学意义(P>0.05);金纳多B组与A组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。4.模型组、金纳多组和硝酸甘油组的cPLA2-γmRNA表达明显增高(P<0.01) ,金纳多A组、金纳多B组的cPLA2-γmRNA表达增高于正常组,但与模型组相比较,明显低于模型组(P<0.01);硝酸甘油组cPLA2-γmRNA的表达高于正常组,但与模型组相比较,明显低于模型组(P<0.01)。金纳多A、金纳多B组与硝酸甘油组比较无明显差异(P>0.05)。结论:1.金纳多可以显著地减小兔心肌缺血再灌注损伤后心肌无复流面积和心肌梗死面积,从而可以减轻心肌损伤的范围;通过金纳多的干预,可以降低cTnT和hs-CRP的含量,说明金纳多可以减轻心肌缺血再灌注损伤的程度,从而起到保护心肌的作用。2.金纳多能明显抑制兔心肌缺血再灌注损伤造成的心肌细胞凋亡数量,降低凋亡指数,减少cPLA2-γ基因表达,提示金纳多可抑制心肌细胞凋亡,从而有效保护心肌,而其作用机制可能和cPLA2-γ基因表达有关。3.两种剂量的金纳多对心肌保护作用的区别不明显,与硝酸甘油组的对照结果没有明显差异。
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