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目的探讨肝癌细胞中HBV与miR-101-3p之间的联系，揭示HBV促进肝癌细胞增殖和迁移的新机制，为microRNA在癌症治疗中的潜在应用提供依据。方法1. qPCR验证基因芯片中HepG2与HepG2.2.15细胞差异表达的miR-101-3p。HepG2细胞瞬时感染表达HBV的腺病毒(Ad-HBV)后，以及SMMC-7721细胞瞬时转染pCH9/3091质粒后，检测miR-101-3p的表达变化。2.构建miR-101-3p的启动子荧光素酶报告质粒(pGL3-miR-101-P)。将pGL3-miR-101-P，pRL-TK及pCH9/3091质粒共同转染入SMMC-7721细胞中,双荧光素酶报告系统检测miR-101-3p启动子的相对活性；检测miR-101-3p启动子在HepG2与HepG2.2.15细胞中活性的差异。3.构建miR-101-3p的过表达质粒(pTARGET-101),购买重庆市科委项目CSTC,2010BB5359miR-101-3p的干扰inhibitor。MTS、流式细胞术、transwell分别检测miR-101-3p以及HBV对细胞增殖、凋亡、迁移的影响。4.利用TargetScan, microRNA.org, miRDB数据库筛选miR-101-3p的靶基因，构建靶基因的3′UTRs荧光素酶报告质粒，荧光素酶检测miR-101-3p对靶基因3′UTRs的作用；过表达与干扰miR-101-3p后，qRT-PCR和Western blot方法检测靶基因的表达差异。在HepG2与HepG2.2.15细胞，Ad-HBV感染的HepG2细胞，以及pCH9/3091转染的SMMC-7721细胞中，用qRT-PCR和Western blot方法检测靶基因的表达差异。5.分别构建靶基因的过表达及干扰质粒；用qRT-PCR和Westernblot方法检测过表达质粒的过表达效果以及干扰质粒的干扰效果；MTS、流式细胞术、transwell检测靶基因的功能。结果1. qPCR结果显示miR-101-3p在HepG2.2.15细胞中的表达显著低于HepG2细胞；HepG2细胞及SMMC-7721细胞瞬时表达HBV后，miR-101-3p的表达均下调。2. miR-101-3p的启动子质粒构建成功。共转染分析结果显示，HBV能明显抑制miR-101-3p启动子活性。3.过表达miR-101-3p后能够明显抑制SMMC-7721细胞的增殖和迁移，促进凋亡；干扰miR-101-3p则结果相反。过表达HBV后与干扰miR-101-3p结果一致。4. TargetScan, microRNA.org, miRDB数据库筛选靶基因，荧光素酶分析miR-101-3p仅对RAP1B起作用。qRT-PCR和Western blot结果显示，miR-101-3p抑制Rap1b的表达，HBV能够促进Rap1b的表达，并且是通过miR-101-3p作用于Rap1b。5.过表达Rap1b后，促进SMMC-7721细胞的增殖和迁移，抑制凋亡；干扰靶基因后，结果相反。结论HBV通过抑制miR-101的启动子活性下调miR-101-3p的表达；miR-101-3p的下调导致Rap1b的表达增强，从而促进细胞的增殖和迁移。该研究为揭示HBV诱导的HCC提供了一种新的分子机制和治疗靶点。