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目的:研究C型GB病毒(GB Virus Type C,GBV-C)感染对HIV唯一启动子--长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)活性的调节作用,探讨GBV-C对HIV复制活性的调控机制,为GBV-C作为治疗HIV感染的制剂走向临床提供理论和实践依据。方法:1、将HIV LTR划分成11个片段,通过分段拼接的方法获得全长634bp的LTR序列,经过琼脂糖凝胶电泳和测序进行鉴定;2、通过XhoⅠ酶和KpnⅠ酶双酶切和T4 DNA连接酶连接,将全长HIV LTR片段连接至pCAT质粒载体,并进行测序鉴定;3、将pLTR-1CAT重组质粒载体转染到Jurkat细胞,经ELISA检测CAT酶活性,以确证重组质粒pLTR-1CAT的高表达;4、分四组细胞进行研究,分别是Jurkat细胞单转染重组质粒pLTR-1CAT组(对照组),Jurkat细胞同时转染重组质粒pLTR-1CAT、感染GBV-C组,Jurkat细胞先转染重组质粒pLTR-1CAT24小时后再感染GBV-C组和Jurkat细胞先感染GBV-C24小时后再转染重组质粒pLTR-1CAT组,后三组为实验组。采用RT-PCR法测定GBV-C含量;ELISA法测定各组转染、感染24、48、96小时后测定氯酶素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)活性。所有数据用单因素ANOVA方差分析进行统计学检验。结果:1.经测序鉴定,正确构建pLTR-1CAT重组质粒载体,建立了HIV LTR启动子模型,为下一步的研究奠定了基础;2.实验组各时间段酶活性表达明显低于对照组(P<0.05),先转染重组质粒pLTR-1CAT 24小时后再感染GBV-C组各时间段酶活性表达明显高于同时转染重组质粒pLTR-1CAT、感染GBV-C组及先感染GBV-C24小时后再转染重组质粒pLTR-1CAT组(P<0.05)。结论:GBV-C感染能引起CAT活性的明显下降,说明GBV-C能显著抑制LTR启动子的活性;提示HIV-LTR启动子是GBV-C及其产物抑制HIV转录调节的关键环节,抑制HIV调节蛋白和结构蛋白的转录是GBV-C病毒抑制HIV复制的可能机制之一。