电针对脑缺血大鼠SVZ区Nestin和PCNA表达的影响

来源 :北京中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fengye1023
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目的:(1)观察电针对脑缺血大鼠行为学,脑组织形态以及缺血侧侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)的巢蛋白(Nestin)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。(2)观察电针对高血脂合并脑缺血大鼠血脂,行为学,脑组织形态学的影响;探索电针对模型大鼠SVZ和缺血半暗带的Nestin、PCNA表达的影响。方法:实验一:24只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针1组、电针2组。电针1组电针双侧“丰隆”(2/100 Hz,1-3 mA),每天1次,连续治疗7天;第8天,电针1、2组和模型组用50%FeCl3滤纸贴敷大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)20分钟造成脑血栓模型,术后电针1、2组电针“丰隆”、“百会”,每天1次,连续7天。术后24小时用神经功能缺损评分(neurological deficit score,NDS)进行行为学检测,苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察缺血半暗带组织形态,免疫组化法检测术后1、7天缺血侧SVZ区Nestin和PCNA的表达。实验二:41只SD大鼠随机分为正常组和高脂饲料喂养组(high fat diet,HFD),HFD大鼠用高脂饲料喂养42天造成高脂血症模型后,随机分为假手术组、模型组、电针1组、电针2组。电针1组电针双侧“丰隆”(2/100 Hz,1-3 mA),每天1次,连续7天。第50天,电针1、2组和模型组用50%FeCl3滤纸贴敷MCA 20分钟造成脑缺血,术后电针1、2组电针“丰隆”、“百会”,每天1次,连续14天。用NDS评定行为学变化,生物化学法检测血脂四项,HE染色观察缺血半暗带形态学改变,免疫组化检测缺血侧SVZ、缺血半暗带Nestin和PCNA的表达。结果:实验一:(1)行为学:术后24小时,模型组动物出现饮食减少,体重减轻,右侧前肢屈曲,原地转圈的症状。与模型组比较,电针1、2组NDS明显降低(P<0.05),神经缺损症状减轻。(2)脑组织形态:脑缺血后1天,模型组神经元排列散乱,细胞核固缩,细胞周围间隙扩大,部分血管红细胞渗出。电针治疗后,缺血半暗带空泡变性减少,组织形态趋于正常。(3)免疫组化结果:假手术组SVZ区Nestin阳性表达较少。与假手术比较,术后1、7天模型组SVZ区Nestin面密度增加(P<0.01)。与模型组比较,电针1、2组侧脑室背外侧角Nestin表达均增高,从术后1天(电针1组P<0.01,电针2组P<0.05)持续至术后7天(P<0.01),两个电针组侧脑室外侧壁Nestin表达在术后1天升高(P<0.01),术后7天升高差异没有统计学意义(P>0.05)。脑缺血术后1天,与模型组比较,电针1组侧脑室背外侧角PCNA面密度升高(P<0.01)。电针1、2组之间差异无统计学意义(P>0.05),但趋势上电针1组高于电针2组。实验二:(1)行为学:脑缺血后24小时,模型组大鼠出现体重减轻,右侧前肢屈曲,向右侧转圈等症状,NDS评分较高。与模型组比较,电针1、2组NDS评分均有所降低(P<0.05),电针1组比电针2组神经缺损症状减轻更为明显。(2)血脂:脑缺血后1、7、14天模型组TC、LDL升高(P<0.05),HDL降低(P<0.05)。与模型组比较,术后14天电针1组TC、LDL降低(P<0.05),HDL升高(P<0.01);电针2 组 LDL 降低(P<0.01),HDL 升高(P<0.05)。(3)脑组织形态:假手术组皮层和纹状体神经元均匀分布、结构完整,与正常组形态基本一致。模型组缺血半暗带神经元大量坏死,细胞核固缩,可见大量空泡样结构,血管中有红细胞渗出,组织形态整体上呈脑缺血改变。电针治疗后,正常神经元明显增多,细胞形态接近正常。(4)Nestin免疫组化结果:在侧脑室背外侧角,与假手术组相比,模型组Nestin面密度在术后1、7天升高(P<0.05)。与模型组比较,术后1、7、14天电针1组(P<0.01)和电针2组(P<0.05)Nestin面密度均增加。电针1组Nestin面密度高于电针2组,但差异无统计学意义(P>0.05)。在侧脑室外侧壁,模型组Nestin表达在术后1、7天(P<0.01)和14天(P<0.05)均增加。与模型组比较,电针1组Nestin面密度在术后1、7天增高(P<0.05),电针2组仅在术后7天增高有统计学意义(P<0.05)。电针1组Nestin阳性表达较电针2组更为明显,但差异无统计学意义(P>0.05)。在缺血半暗带,模型组Nestin表达在术后1、7、14天均显著增加(P<0.01)。与模型组比较,电针1组Nestin面密度在术后1、7天增高(P<0.05),电针2组在术后14天增高有统计学意义(P<0.05)。电针1组Nestin阳性表达较电针2组更为明显,但差异无统计学意义(P>0.05)。(5)PCNA免疫组化结果:在侧脑室背外侧角,与假手术组相比,模型组缺血侧侧脑室背外侧角PCNA面密度在术后1天(P<0.01),7天(P<0.05)均升高。与模型组比较,电针1组PCNA面密度在术后1、7、14天均增高(P<0.01),电针2组仅在术后7天增高有统计学意义(P<0.01)。在侧脑室外侧壁,模型组PCNA表达在术后1、7天增加(P<0.05)。与模型组比较,电针1组PCNA面密度在术后1天(P<0.05),术后7、14天(P<0.01)均增高,电针2组仅在术后14天增高(P<0.01)。在缺血半暗带,模型组PCNA表达在术后1、7、14天均显著增加(P<0.01)。与模型组比较,术后1、7、14天,电针1组(P<0.01)和电针2组(P<0.05)PCNA面密度均增高。电针1组PCNA阳性表达比电针2组更为明显,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)电针“丰隆”、“百会”可以改善脑缺血大鼠的神经功能,减轻缺血性脑损伤,促进SVZ区Nestin和PCNA的表达,达到脑损伤后神经修复的目的;在脑缺血前就进行电针干预效果更理想。(2)电针“丰隆”、“百会”可以调节血脂代谢,改善高血脂合并脑缺血大鼠缺血半暗带的组织形态,减轻神经功能缺损症状;在高血脂阶段电针“丰隆”,脑缺血后电针“丰隆”、“百会”效果更佳。(3)电针可能通过促进SVZ区神经干细胞在高脂血症-脑缺血损伤中的增殖来改善大脑的修复和再生。
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