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口蹄疫(foot-and-mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus, FMDV)所引起的一类急性传染病,该病主要是引起感染的动物的口、舌、唇、蹄等部位发生水泡,最终破烂形成烂斑,给畜牧业经济带来巨大的损失。口蹄疫病毒属于小RNA病毒科,口蹄疫病毒属,基因组为单股正链RNA,全长约7800bp,能够编码四种结构蛋白(VP、VP2、VP3、VP4)和七种非结构蛋白(2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D)。其中3D蛋白是口蹄疫病毒编码的一种RNA聚合酶,在口蹄疫病毒RNA的复制方面有重要作用。研究者在口蹄疫病毒3D蛋白上发现了多个Th细胞表位,并且能够有效的辅助B淋巴细胞活化产生体液免疫应答,为新型口蹄疫疫苗和佐剂研究奠定了基础,对于口蹄疫的防治具有重要意义。本实验为了获得含有多个Th细胞表位的重组蛋白,根据Mari’a M等的研究,设计了两个基于3D蛋白序列的组合型Th表位肽；设计优化并人工合成相应的核酸序列；并用原核表达的方法,构建原核表达质粒pET28a-Th115和pAIYM-Th157;并将重组质粒转化BL21,分别经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳分析,结果显示,成功获得了Th115(16KD)和Th157(19KD)重组蛋白,且经Western-blot鉴定,两种重组蛋白都能与His单抗发生特异性反应,为预期的目的蛋白。对表达产物进行可溶性分析发现,目的蛋白部分部以包涵体形式存在,部分存在于上清内,将两种目的蛋白的可溶性上清液经镍柱纯化后获得了较高浓度和较高纯度的Th115和Th157重组蛋白。将3D Thl15蛋白和Th157蛋白作为Th佐剂分别与主抗原按1／2.5的比例配制疫苗免疫猪群并和只添加主抗原的疫苗作对照,并且以PBS免疫作为阴性对照。用ELISA方法测定免疫后猪的抗体水平,结果显示,PBS免疫的猪血清无抗体产生；只含主抗原的疫苗免疫的猪群抗体效价为1：12800; Th157蛋白添加组的抗体效价为1：51200；Th115蛋白添加组的抗体效价达到了1：102400。用MTT法测定免疫后T淋巴细胞增殖情况,结果显示,添加Th115和Th157蛋白组的SI值显著高于只含主抗原组SI。实验结果表明重组Th115蛋白和Thl57蛋白能有效提升FMDV抗原表位的免疫效果,对于口蹄疫新型疫苗Th佐剂的研发具有重大帮助。