【摘 要】
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研究的背景和目的:在临床上,膀胱癌是最常见的恶性肿瘤之一。在世界范围内,膀胱癌是男性泌尿系统占据发病率第二位的恶性肿瘤,其发病率在男性常见的肿瘤中位居第四位,死亡率排第九位。早期膀胱癌通过手术治疗可以取得较好的效果,但中晚期的膀胱癌治疗比较困难,容易出现复发和转移,并且肌层浸润性膀胱癌5年生存率<50%。因此,探究膀胱癌的复发转移机制,寻找肿瘤潜在的治疗靶点迫切重要。现有研究表明,肿瘤容易复发及转
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研究的背景和目的:在临床上,膀胱癌是最常见的恶性肿瘤之一。在世界范围内,膀胱癌是男性泌尿系统占据发病率第二位的恶性肿瘤,其发病率在男性常见的肿瘤中位居第四位,死亡率排第九位。早期膀胱癌通过手术治疗可以取得较好的效果,但中晚期的膀胱癌治疗比较困难,容易出现复发和转移,并且肌层浸润性膀胱癌5年生存率<50%。因此,探究膀胱癌的复发转移机制,寻找肿瘤潜在的治疗靶点迫切重要。现有研究表明,肿瘤容易复发及转移与肿瘤组织中存在干细胞密切相关,越来越多研究关注肿瘤细胞耐药机制的研究,肿瘤干细胞成为关注焦点。肿瘤干细胞因其自我更新能力、分化潜能及对外界损伤因素的极强修复能力,在维持肿瘤的恶性增殖、侵袭、转移、复发和耐药等方面起着决定性作用。目前在膀胱癌中也分离出具有肿瘤干细胞特点的亚细胞群。膀胱癌的发生为多基因作用的结果,因此研究原癌基因与癌性抑制因子之间的相互作用有重要意义。CIP2A作为蛋白磷酸酶的抑制分子已经证实其在多种肿瘤组织中呈高表达,CIP2A主要通过抑制蛋白磷酸酶对c-myc的脱磷酸化作用,使c-myc趋于稳定,从而促进肿瘤的发生及进展。CIP2A在膀胱癌组织中的表达及功能报道较少,对膀胱癌干细胞的在体内外生物学功能影响目前尚无报道,本研究拟利用细胞生物学及shRNA的理论和方法,探讨CIP2A在膀胱癌细胞及膀胱癌干细胞增殖、凋亡和侵袭能力的功能作用和机制。并构建动物皮下成瘤模型,初步探讨CIP2A对膀胱癌进展的调控机制。方法:1、采用RT-qPCR测定CIP2A在膀胱癌组织和膀胱癌细胞中的表达水平,分析CIP2A的表达水平与膀胱癌EMT进程的关系。2、选用无血清培养基联合有限稀释法分离培养膀胱癌干细胞,采用qPCR分别对MB49膀胱癌细胞和膀胱癌干细胞标志物CD133,CD44,OCT4进行mRNA含量进行检测。3、通过慢病毒转染,构建稳转沉默CIP2A的膀胱癌干细胞株,采用MTT实验、Transwell实验、流式细胞术和Western Blot检测沉默CIP2A对膀胱癌细胞干细胞增殖、侵袭、细胞周期及凋亡的影响。4、通过建立用膀胱癌干细胞和shRNA-CIP2A膀胱癌干细胞构建裸鼠皮下膀胱癌移植瘤动物模型来验证CIP2A对小鼠荷瘤情况的影响,以及通过免疫组化明确肿瘤组织中VEGF和NF-κB的表达水平。结果:1、膀胱癌组织中CIP2A的表达显著高于癌旁正常组织。在MIBC中的表达高于NMIBC,敲低CIP2A抑制EMT标志物Snaill,Vimentin的表达,相反,上调E-cadherin的表达。2、通过无血清培养法成功分离出膀胱癌干细胞,通过qPCR检测膀胱癌干细胞的干性标记物的含量均显著高于MB49膀胱癌细胞。3、沉默CIP2A显著下调膀胱癌干细胞的CIP2A表达水平;明显抑制膀胱癌干细胞的增殖;明显抑制膀胱癌干细胞侵袭能力。4、CIP2A干扰后小鼠皮下肿瘤生长速度减慢,肿瘤体积减小;此外,免疫组化实验证实沉默CIP2A后,肿瘤组织中的VEGF及NF-κB的表达显著减低。结论:CIP2A在膀胱癌细胞中表达增高,具有促癌作用;沉默CIP2A显著下调膀胱癌干细胞的CIP2A表达水平,抑制膀胱癌干细胞的增殖侵袭能力,肿瘤组织生长速度从而抑制膀胱癌的恶性进展,;初探CIP2A可能是通过抑制VEGF、NF-κB的表达影响膀胱癌干细胞增殖、凋亡。其初步机制可能是通过降低VEGF及NF-κB的表达水平来调控,有待后续研究进一步证实。
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