红车轴草与葛根中异黄酮类化合物的分离提取及体外活性研究

来源 :长春师范大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:minyuan07
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红车轴草和葛根是中国传统的药用植物,当前主要集中于异黄酮类化合物抗肿瘤、抗肝损伤等研究,对于抗痛风、改善心脑血管系统和抗衰老等化合物的分离提纯及体外活性的相关报道较少。因此,为进一步开发其药用价值,应用现代科学技术对红车轴草和葛根中抗痛风、改善心脑血管系统和抗衰老等化合物的分离提纯及体外活性尚需深入研究。本论文以亲和超滤质谱(UF-MS)技术为核心,对抗痛风、抗心脑血管疾病、抗衰老等异黄酮类化合物进行活性筛选研究,在以活性为导向的基础上,应用半制备高效液相色谱(Semi-preparative HPLC)技术分离纯化异黄酮类化合物,利用液质联用(LC-MS)技术分析鉴定经过分离纯化的化合物纯度和化学结构,具体研究内容如下:首先,我们以红车轴草为研究对象,采用LC-MS鉴定出其中6种异黄酮类化合物,选取乳酸脱氢酶、黄嘌呤氧化酶以及α-葡萄糖苷酶为生物靶分子,利用UF-MS筛选红车轴草中4种乳酸脱氢酶抑制剂,与0.2 U/mL的酶结合强度分别为鹰嘴豆芽素A(40.47%)、染料木素(23.57%)、芒柄花素(20.42%)和芒柄花苷(7.90%);5种黄嘌呤氧化酶抑制剂,与0.2 U/mL的酶结合强度分别为黄豆苷(77.92%)、芒柄花素(59.24%)、黄豆苷元(45.89%)、鹰嘴豆芽素(36.83%)和芒柄花苷(13.69%);4种α-葡萄糖苷酶抑制剂,与0.2 U/mL的酶结合强度分别为鹰嘴豆芽素A(29.07%)、染料木素(20.03%)、黄豆苷元(15.08%)和芒柄花素(12.60%)。并利用Semi-preparative HPLC分离纯化得到了黄豆苷(95.42%)、芒柄花苷(92.21%)、黄豆苷元(98.63%)、染料木素、(95.15%)、芒柄花素(94.14%)和鹰嘴豆芽素A(96.37%)。其次,我们以葛根为研究对象,采用响应面法优化超声辅助离子液体技术对葛根中异黄酮类化合物进行分离提取研究,确定了最佳提取工艺:提取剂为[Emim][BF4],浓度为1.25 mol/L,提取时间为40 min,提取功率为240 W,优化后的提取率为85.8 mg/g。采用LC-MS鉴定出葛根中3种异黄酮类化合物,采用UF-MS筛选出葛根中3种脂肪氧化酶抑制剂,与10.0 U/mL的酶结合强度分别为黄豆苷(65.39%)、葛根素(46.70%)和黄豆苷元(14.95%)。建立PC12细胞损伤模型,观察葛根中异黄酮类化合物对细胞活力的影响规律,与MPP+损伤组比较,葛根实验组细胞存活率由65.43%提高至79.92%。利用Semi-preparative HPLC分离纯化得到葛根素(97.14%)、黄豆苷(94.68%)和黄豆苷元(93.40%)。综上,本论文对红车轴草和葛根进行了系统的分离、结构分析和活性筛选与评价研究,为药用植物红车轴草和葛根的应用提供了支持。
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