【摘 要】
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研究背景与目的感染性骨缺损的治疗难点是控制感染和完成骨重建。富血小板血浆(Platelet rich Plasma,PRP)含有多种生物活性物质具有强大的促愈合性质,但其本身的抗菌活性很弱,不足以单独用于临床抗感染,我们的抗菌实验也证明其单独抗菌效果有限。因此,我们设想将PRP作为生物活性材料负载抗生素(PADS),治疗感染性骨缺损,探究PRP负载抗生素在抗感染的同时促进骨愈合,加速完成骨重建。为
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研究背景与目的感染性骨缺损的治疗难点是控制感染和完成骨重建。富血小板血浆(Platelet rich Plasma,PRP)含有多种生物活性物质具有强大的促愈合性质,但其本身的抗菌活性很弱,不足以单独用于临床抗感染,我们的抗菌实验也证明其单独抗菌效果有限。因此,我们设想将PRP作为生物活性材料负载抗生素(PADS),治疗感染性骨缺损,探究PRP负载抗生素在抗感染的同时促进骨愈合,加速完成骨重建。为感染性骨缺损寻找新的治疗方法。方法通过两次离心法从大鼠血液中提取制作PRP,用PRP负载万古霉素、克林霉素、头孢他啶制作成为PADS。利用药敏试验探究PADS抗菌效果。借助高效液相色谱仪研究PADS在3天内的药物释放特点。利用ELISA试验明确PADS的生物活性物质是否受抗生素影响。利用H&E染色、免疫荧光染色及扫描电镜研究PADS的组织学结构和纤维蛋白网络和抗生素种类、剂量的关系。用大鼠原代细胞,通过CCK8试验、EDU染色、活死染色,探索PRP对炎症状态下骨髓间充质干细胞(BMSCs)活性和增殖的影响。其次,在大鼠原代细胞诱导分化的过程中,在LPS的刺激下,利用ALP染色、茜素红染色和WB,评估PRP对炎症状态下成骨细胞分化的影响。结果1.利用两次离心法提取出的PRP中血小板浓度为全血的5倍。2.PRP负载抗生素构成PADS以后大大增强了PRP对金葡菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌的抗菌活性,而且相对比于抗生素,相同剂量的情况下并没有因为PRP,而影响抗生素的抗菌活性。利用高效液相色谱法检测PADS 3天内各个时间点的药物浓度发现,约60%的万古霉素(VAN)和头孢他啶(CAZ)在10min内释放,然后在3天内释放速率逐渐降低。然而,90%的克林霉素在10分钟内释放。但72小时内各个组的药物释放浓度都超过MIC的10倍以上。3.ELISA和PADS形态学研究表明,负载抗生素可降低PRP释放的生长因子浓度,并以剂量依赖的方式干扰血小板梁和纤维蛋白网络的结构形成,但较低剂量的抗生素维持了其抗菌作用,同时PADS释放的生长因子、血小板纤维蛋白束结构、纤维蛋白网络未受影响。4.PRP能够增加BMSCs的活性,其中一部分是增加了BMSCs的增殖,另一部分是减少了BMSCs在炎症状态下的死亡。同时,PRP还能促进成骨细胞在炎症状态下的分化,增加成骨相关蛋白RUNX2和胶原蛋白Ⅰ的表达。结论虽然治疗感染性骨缺损是一个骨科巨大的难题,但是通过试验发现PRP负载抗生素能够在组织周围维持高浓度的抗生素,有利于机体抗感染。并且PADS中生长因子活性在特定剂量下受抗生素影响较小,PRP同时还能增加BMSCs的活性,促进BMSCs和成骨细胞的增殖和分化,其高效的抗菌活性和促愈合能力具有应用价值。
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