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【目的】
1．利用TCGA数据库(TheCancerGenomeAtlas，肿瘤基因组图谱数据库)，分析SHOX2基因mRNA表达和甲基化在肺腺癌(Lung Adenocarcinoma，LUAD)中的临床病理联系，为该生物标志物的临床应用提供理论依据。
2.利用WB检测SHOX2及其相关蛋白在不同EGFR突变亚型的肺腺癌细胞中的表达，为分析SHOX2与EGFR突变、P53和RASSF1A的相关性，为该基因的基础分子研究提供理论依据。
3．在H1975中利用siRNA技术下调SHOX2表达后，检测相关蛋白表达水平、转移能力和凋亡变化，分析SHOX2缺失后对肺腺癌细胞生物学特性的影响，为该基因促癌功能的研究打下基础。
【方法】
1.基于TCGA数据库，通过UALCAN在线分析工具研究了SHOX2mRNA表达和启动子甲基化与LUAD患者临床特征之间的关系。
2.基于TCGA数据库，使用Wanderder线上分析SHOX2基因在肺腺癌组织和癌旁正常组织的甲基化情况。
3.基于TCGA数据库，通过UALCAN在线分析工具基于TCGA数据研究了SHOX2启动子甲基化与LUAD患者临床特征之间的关系。
4.基于TCGA数据库，使用LinkedOmics和MEXPRESS工具分析了SHOX2高表达与DNA甲基化、拷贝数变异的相关性。
5.通过提取核酸，采用ARMS-PCR法检测LUAD细胞常见的驱动突变(包括EGFR、KRAS等)，采用MSP-PCR发检测RASSF1A、SHOX2甲基化情况。6.常规体外培养LUAD细胞，Westernblot检测EGFR、P53、RASSF1A和SHOX2蛋白表达水平，并分析其关联。
7.设计针对SHOX2基因特异性siRNA并瞬时转染H1975细胞，通过PCR法和Westernblot法验证在H1975细胞株中成功下调SHOX2。
8.通过transwell实验、流式细胞术检测H1975细胞在下调SHOX2后在迁移能力和凋亡方面的变化。
【结果】
1.SHOX2在LUAD肿瘤组织高表达，且其表达水平随着年龄、T分期、N分期提高而增高，表明SHOX2与预后差有关。
2.SHOX2在LUAD肿瘤组织低甲基化，且在LUAD早期甲基化水平较晚期高，表明SHOX2甲基化检测可作为肺癌早期诊断标记物。
3.在肺腺癌中，SHOX2表达量与启动子和第1外显子中的DNA甲基化呈弱负相关(-0.1＜r＜-0.3，P＜0.001)，但与基因体和3’UTR区中的DNA甲基化呈中弱强度正相关(0.1＜r＜0.5，P＜0.001)。此外，SHOX2表达量与基因拷贝数中等强度正相关(r=0.325，P＜0.001)。
4.与EGFR野生型肺腺癌细胞株相比，SHOX2和P53在EGFR突变肺腺癌细胞中明显高表达(P＜0.05)，提示SHOX2和P53高表达与EGFR突变易感性密切相关。
5.H1975细胞下调SHOX2后侵袭转移能力减弱和凋亡增强。
【结论】
1.SHOX2在肺腺癌组织中高表达和基因低甲基化，与肺腺癌的预后差有关。
2.SHOX2甲基化检测可作为肺腺癌早期诊断标记物。
3.SHOX2高表达与基因体和3’UTR区中的DNA甲基化正相关，且受基因拷贝数的影响。
4.在肺腺癌细胞中，SHOX2高表达与EGFR突变和P53突变易感性密切相关。
5.SHOX2可促进肺腺癌细胞侵袭转移和抑制凋亡。
1．利用TCGA数据库(TheCancerGenomeAtlas，肿瘤基因组图谱数据库)，分析SHOX2基因mRNA表达和甲基化在肺腺癌(Lung Adenocarcinoma，LUAD)中的临床病理联系，为该生物标志物的临床应用提供理论依据。
2.利用WB检测SHOX2及其相关蛋白在不同EGFR突变亚型的肺腺癌细胞中的表达，为分析SHOX2与EGFR突变、P53和RASSF1A的相关性，为该基因的基础分子研究提供理论依据。
3．在H1975中利用siRNA技术下调SHOX2表达后，检测相关蛋白表达水平、转移能力和凋亡变化，分析SHOX2缺失后对肺腺癌细胞生物学特性的影响，为该基因促癌功能的研究打下基础。
【方法】
1.基于TCGA数据库，通过UALCAN在线分析工具研究了SHOX2mRNA表达和启动子甲基化与LUAD患者临床特征之间的关系。
2.基于TCGA数据库，使用Wanderder线上分析SHOX2基因在肺腺癌组织和癌旁正常组织的甲基化情况。
3.基于TCGA数据库，通过UALCAN在线分析工具基于TCGA数据研究了SHOX2启动子甲基化与LUAD患者临床特征之间的关系。
4.基于TCGA数据库，使用LinkedOmics和MEXPRESS工具分析了SHOX2高表达与DNA甲基化、拷贝数变异的相关性。
5.通过提取核酸，采用ARMS-PCR法检测LUAD细胞常见的驱动突变(包括EGFR、KRAS等)，采用MSP-PCR发检测RASSF1A、SHOX2甲基化情况。6.常规体外培养LUAD细胞，Westernblot检测EGFR、P53、RASSF1A和SHOX2蛋白表达水平，并分析其关联。
7.设计针对SHOX2基因特异性siRNA并瞬时转染H1975细胞，通过PCR法和Westernblot法验证在H1975细胞株中成功下调SHOX2。
8.通过transwell实验、流式细胞术检测H1975细胞在下调SHOX2后在迁移能力和凋亡方面的变化。
【结果】
1.SHOX2在LUAD肿瘤组织高表达，且其表达水平随着年龄、T分期、N分期提高而增高，表明SHOX2与预后差有关。
2.SHOX2在LUAD肿瘤组织低甲基化，且在LUAD早期甲基化水平较晚期高，表明SHOX2甲基化检测可作为肺癌早期诊断标记物。
3.在肺腺癌中，SHOX2表达量与启动子和第1外显子中的DNA甲基化呈弱负相关(-0.1＜r＜-0.3，P＜0.001)，但与基因体和3’UTR区中的DNA甲基化呈中弱强度正相关(0.1＜r＜0.5，P＜0.001)。此外，SHOX2表达量与基因拷贝数中等强度正相关(r=0.325，P＜0.001)。
4.与EGFR野生型肺腺癌细胞株相比，SHOX2和P53在EGFR突变肺腺癌细胞中明显高表达(P＜0.05)，提示SHOX2和P53高表达与EGFR突变易感性密切相关。
5.H1975细胞下调SHOX2后侵袭转移能力减弱和凋亡增强。
【结论】
1.SHOX2在肺腺癌组织中高表达和基因低甲基化，与肺腺癌的预后差有关。
2.SHOX2甲基化检测可作为肺腺癌早期诊断标记物。
3.SHOX2高表达与基因体和3’UTR区中的DNA甲基化正相关，且受基因拷贝数的影响。
4.在肺腺癌细胞中，SHOX2高表达与EGFR突变和P53突变易感性密切相关。
5.SHOX2可促进肺腺癌细胞侵袭转移和抑制凋亡。