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肝癌是我国多发癌症之一,每年约有600,000人死于肝癌。由于治疗方法的局限,患肝癌的病人在术后的五年生存率一直没有明显提高。因此寻找到治疗肝癌的新靶点,采用非传统的方式治疗癌症成为当前迫切的问题,而MicroRNA的发现及深入研究为治疗癌症提供了这种可能。MicroRNA是一种广泛存在于真核生物的小分子非编码RNA,参与多种初始转录过程,miRNA由基因组转录后,在Drosha酶和Dicer酶的切割作用下形成具有发夹结构的miRNA前体。它可以通过降解mRNA或抑制mRNA翻译这两种方式调控基因的表达。由于miRNA对靶基因有调控作用,它参与一系列的生物过程,包括细胞周期调控、细胞分化、侵袭转移、新陈代谢、发育及衰老等。在近几年中,多项研究发现在病人的肝癌组织样本中可检测到众多miRNA的异常表达,为了检测miRNA与肝癌的相关性,本研究中利用miRNA芯片杂交技术及实时定量PCR技术分析了25例肝癌病人的癌组织和癌旁组织的miRNA表达。发现miR-193b、miR-101、miR-148a、miR-422b、miR-451在两种组织之间存在表达差异,其中miR-193b在肝癌组织中表达显著下调。我们进一步探索miR-193b的生物学效应,利用生物信息学预测与miR-193b结合的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及western blot方法进行验证,我们发现了由miR-193b直接调控的两个靶基因,MCL1 (Myeloid cell leukemia sequence 1)和CCND1 (Cyclin D1).我们还发现miR-193b通过抑制MCL1和CCND1的表达而增强肝癌细胞对药物的敏感性及抑制肿瘤细胞的增殖。结论:1、MCL1和CCND1是miR-193b的靶基因。根据生物信息学预测软件结果显示,MCL1和CCND1均存在miR-193b的直接调控靶点。双荧光素酶报告基因实验证实miR-193b直接作用MCL1和CCND1的3’UTR区。过表达miR-193b可下调肝癌细胞HepG2中MCL1和CCND1的蛋白表达水平。2、miR-193b通过负调控MCL1增加肝癌细胞对抗癌药物的敏感性,从而诱导细胞发生凋亡。3、miR-193b通过负调控CCND1诱导肝癌细胞发生周期阻滞,抑制细胞增殖。4、通过细胞克隆形成实验和裸鼠成瘤实验,发现miR-193b抑制体外和体内培养的细胞形成肿瘤。综上,在本研究中,我们发现miR-193b在肝癌细胞和组织中低表达,寻找到miR-193b的靶基因并探究其在肝癌细胞中的功能。说明miR-193b作为一个肿瘤抑制分子,可以通过抑制多种癌基因的表达而抑制肝癌的发生与发展。