论文部分内容阅读
背景与目的:胰腺癌是恶性程度高的消化道肿瘤,易转移,预后差,5年生存率很低。研究显示葡萄籽原花青素在抗肿瘤方面起着重要的作用,并参与多种细胞信号传导途径的调节。葡萄籽原花青素通过调控多种mi RNA在肿瘤中起抑制肿瘤生长的作用。因此,深入探讨葡萄籽原花青素的抗肿瘤机制,为开辟胰腺癌的治疗新途径提供理论和实验依据。本课题研究目的:(1)探讨葡萄籽原花青素对人胰腺癌细胞As PC-1增殖、迁移、和凋亡的影响。(2)探讨葡萄籽原花青素是否通过下调胰腺癌细胞mi R-27a表达影响胰腺癌细胞的增殖、迁移、凋亡。(3)探讨葡萄籽原花青素是否通过上调胰腺癌细胞let-7a表达影响胰腺癌细胞的增殖、迁移、凋亡,进而发挥其抗肿瘤作用。方法:(1)以人胰腺癌细胞As PC-1为研究对象,采用噻唑蓝比色法(MTT)、Transwell、创伤愈合实验和Annexin V-FITC/PI双染实验检测葡萄籽原花青素对人胰腺癌细胞影响。(2)采用实时荧光定量PCR检测葡萄籽原花青素对人胰腺癌细胞mi R-27a、let-7a表达的影响。(3)通过脂质体介导的瞬时转染mi R-27a inhibitors下调mi R-27a和let-7a mimics上调let-7a,结合葡萄籽原花青素处理细胞后,探索两种mi RNA在胰腺癌细胞中的抗肿瘤的具体作用机制。蛋白印迹实验检测mi R-27a下游靶蛋白FOXO1蛋白表达。结果:1.葡萄籽原花青素能够抑制人胰腺癌细胞增殖、抑制其迁移能力,促进细胞凋亡。与对照组相比,随葡萄籽原花青素浓度的递增其对胰腺癌细胞As PC-1抑制作用随之增强(P<0.05),且呈浓度依赖性。MTT实验测得胰腺癌细胞As PC-1的IC50值为75μg/m L,在随后的一些实验中我们将使用这一浓度进行检测。2.葡萄籽原花青素下调胰腺癌细胞mi R-27a表达。葡萄籽原花青素作用胰腺癌细胞48h后,q RT-PCR结果表明,药物处理组细胞内mi R-27a表达显著低于对照组(P<0.05)。并通过下调mi R-27a抑制了胰腺癌细胞的增殖、迁移能力,促进肿瘤细胞凋亡。而且葡萄籽原花青素通过下调mi R-27a进而上调了As PC-1细胞中FOXO1蛋白表达。3.葡萄籽原花青素上调let-7a表达。葡萄籽原花青素作用胰腺癌细胞后48h后,q RT-PCR结果表明,药物处理组细胞内let-7a表达明显高于对照组(P<0.05)。葡萄籽原花青素通过上调let-7a抑制了胰腺癌细胞的增殖、迁移能力,促进肿瘤细胞凋亡。结论:1.葡萄籽原花青素能够抑制胰腺癌细胞As PC-1增殖、迁移能力,诱导细胞凋亡。2.葡萄籽原花青素能够通过下调胰腺癌细胞As PC-1中mi R-27a的表达进而上调FOXO1蛋白的表达,从而抑制胰腺癌细胞生长和迁移,诱导细胞凋亡。3.葡萄籽原花青素能够通过上调胰腺癌细胞As PC-1中let-7a的表达从而抑制胰腺癌细胞生长和迁移,诱导细胞凋亡。