人类β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因β3GnT8(GalT7)和β3GnT2在白血病细胞株中功能相关性初步探索

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目的:β1,3—N—乙酰氨基葡萄糖基转移酶8(β3GnT8)即β3GalT7是本实验室通过电子克隆得到的一个新型的人类糖基转移酶,通过同源序列比对确定其属于β3糖基转移酶大家族。有学者报道,β3GnT2和β3GnT8(GalT7)能够在体外形成异二聚体,此复合物的催化活性比两者各自的酶活性显著增强。本文旨在对不同白血病细胞株中β3GnT2和β3GnT8(GalT7)的表达变化,探究两者在白血病中的功能相关性。 方法: 1.采用RT—PCR技术,在8种白血病细胞株及24例白血病病人骨髓有核细胞中检测β3GnT8(GalT7)、β3GnT2,mRNA水平的表达,以10例正常成人骨髓有核细胞作相对正常对照。 2.构建β3GnT8(GalT7)的RNA干扰真核表达载体并得到稳定的β3GnT8(GalT7)基因敲减细胞株。 3.利用RT—PCR和Western blot分别分析细胞株转染前后β3GnT8(GalT7)、β3GnT2在mRNA水平和蛋白水平的表达变化。 结果: 1.β3GnT8(GalT7)在SHI-1、THP-1、HL-60、K562、NB4、U937细胞和18例初诊白血病病人骨髓标本中有不同程度的表达,在KG1,Raji细胞和相对正常对照中没有表达;β3GnT2在SHI-1、THP-1、HL-60、K562、NB4、U937、Raji细胞、4个相对正常对照和16例初诊白血病病人骨髓标本中有不同程度的表达,在KG1细胞中和6个相对正常对照中没有表达。 2.成功构建β3GnT8(GalT7)的RNA干扰真核表达载体。 3.RT—PCR和Western blot结果显示的β3GnT8(GalT7)和β3GnT2的mRNA和蛋白表达都随着β3GnT8(GalT7)的表达下降而抑制。 结论:实验显示,β3GnT2和β3GnT8(GalT7)在不同白血病细胞株中有不同程度的表达,提示β3GnT8(GalT7)基因的过表达从而使β3GnT2活性大大增加最终导致恶变细胞中聚乙酰半乳糖胺增多,而促进其浸润转移。β3GnT8(GalT7)和β3GnT2在白血病甚至肿瘤的浸润、转移中的作用具有一定的相关性。
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