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背景和目的细胞毒性T淋巴细胞（CD8+T淋巴细胞）是免疫系统细胞免疫反应中的主力军,可以特异性识别并杀伤感染、损伤或功能异常的细胞,包括肿瘤细胞。但在肿瘤微环境中,抗原持续存在,CD8+T淋巴细胞不能持续发挥肿瘤杀伤作用,而是分化成耗竭性T淋巴细胞,导致促炎性因子分泌降低,表面抑制性受体表达升高,从而失去其杀伤功能。已有研究报道称免疫球蛋白G（Immunoglobulin G,IgG）能直接或间接地干扰树突状细胞等辅助细胞进而抑制T淋巴细胞的增殖。但关于IgG各亚类对CD8+T淋巴细胞的作用还未有深入的研究。IgG4在食管癌肿瘤组织浸润的B淋巴细胞中高表达,且能通过Fc-Fc反应与肿瘤抗原特异性结合的IgG1,从而抑制肿瘤免疫作用;IgG4可能也对CD8+T淋巴细胞的免疫效应有直接或间接影响,但目前未见报道。本文主要关注IgG4及其它IgG亚类对于CD8+T淋巴细胞在增殖、细胞因子分泌和抑制性受体表达等方面的作用,试图解析IgG4及其它IgG亚类对CD8+T淋巴细胞的可能机制。材料与方法本研究从正常成年人外周血提取外周血单个核细胞,通过CD8+T淋巴细胞阴选试剂盒分离出CD8+T淋巴细胞,分离出的CD8+T淋巴细胞用含有10%胎牛血清、150 U/m L人重组白细胞介素2、5 ng/m L人重组白细胞介素15和X-VIVO 15培养基进行培养,再通过10μg/m L包被的CD3（OKT3）单克隆抗体和2μg/m L CD28单克隆抗体溶液共刺激细胞后进行分组,各组分别加入IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、静脉注射用免疫球蛋白（intravenous immunoglobulin,IVIG）共培养,之后使用发光法细胞增殖/毒性检测试剂盒检测细胞增殖活性;采用酶联吸附反应（ELISA）检测细胞上清液中颗粒酶B（Granzyme B）、干扰素γ（Interferonγ,IFNγ）和肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factorα,TNFα）的分泌情况;采用实时荧光定量PCR检测CD8+T淋巴细胞表面的抑制性受体,如细胞程序性死亡受体1（programmed cell death protein 1,PD-1）、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（Cytotoxic T Lymphocyte Antigen 4,CTLA-4）和白细胞相关免疫球蛋白样受体1（Leukocyte-associated Immunoglobulin-like Receptor 1,LAIR-1）等的RNA表达情况;采用细胞甩片和细胞免疫荧光,检测Fc受体阻断剂阻断前后,FITC偶联的IgG4与CD8+T淋巴细胞的结合情况。结果与讨论我们发现0.05 mg/m L与0.5 mg/m L IgG4对于未激活的CD8+T淋巴细胞的增殖活性有明显抑制作用,IgG1/2/3和IVIG对未激活的CD8+T淋巴细胞增殖活性无抑制作用;0.5 mg/m L IgG4对CD8+T淋巴细胞分泌细胞因子TNFα、IFNγ和Granzyme B均有明显抑制作用,0.5 mg/m L IgG1和IVIG能抑制IFNγ的分泌,0.5 mg/m L IgG1和IgG3能抑制Granzyme B的分泌,其中IgG4的抑制作用最为明显;0.5 mg/m L IgG4能显著提高CD8+T淋巴细胞表面抑制性受体PD-1/CTLA-4的m RNA表达;通过细胞免疫荧光发现FITC偶联的IgG4能够与激活的CD8+T淋巴细胞结合,且这种结合能够被Fc受体阻断。通过基于人类肿瘤基因图谱数据库和基因型组织表达数据库的RNA-seq数据的基因表达谱交互分析数据库发现,IgG4基因IGHG4在多种肿瘤中,肿瘤组织表达量相比正常组织高。本课题组发现IgG4的增高是由肿瘤组织中大量浸润的IgG4阳性B淋巴细胞造成。结论IgG4在大多数肿瘤组织中高表达,能够通过FcγR与CD8+T淋巴细胞结合,抑制其增殖、细胞因子分泌,提高其抑制性受体m RNA表达水平,从而抑制CD8+T细胞的杀伤功能,促使其耗竭,进而可能促进肿瘤免疫逃逸。