羊口疮病毒（Orf virus,ORFV）属于痘病毒科副痘病毒属,该病毒为有囊膜病毒,具有较大的双链DNA基因组。ORFV具有较强的感染性,主要感染山羊、绵羊、骆驼、牛等其他反刍动物。羊口疮（Orf）是由ORFV引起的一种人兽共患的传染病,患病羊表现出嘴唇、口吻、鼻孔及乳房周围皮肤、黏膜形成丘疹,囊泡,脓疱,结痂等特点,临床上该病易与羊痘等疾病混淆。Orf在全球范围内流行,其中在我国新疆、内蒙古、甘肃、湖北和福建等地均有报道,该病一年四季均可发病,春秋季节多发,给养羊业造成了严重的经济损失。目前,在Orf的防治方面,主要依靠接种疫苗预防该病,临床上没有特效的抗病毒药物,发病后通过药物治疗细菌继发感染及改善饲养管理促进机体康复,现有疫苗效果不理想,该病仍然是影响我国养羊业的主要疫病之一。因此,建立准确、快速的检测方法对该病的防控具有重要意义。为了解ORFV-FJND株115基因及其编码蛋白的免疫学等特性,本研究依据ORFV在Gen Bank中的115基因序列设计一对特异性引物,采用PCR技术扩增出ORFV 115基因;将该基因克隆至pMC100-M克隆载体,构建重组质粒pMC100-M-115并进行测序。利用生物信息学软件DNAMAN分析ORFV 115基因序列同源性及所编码的氨基酸,运用软件MEGA7.0构建遗传进化树,结果显示,ORFV-FJND株的ORFV 115基因全长450 bp,编码149个氨基酸,该核苷酸序列与Genbank里收录的国内外15株ORFV的115基因核苷酸同源性为84.4%～98.9%,与福建2012年分离到的ORFV-YX（No.KP010353.1）株的115基因核苷酸序列同源性高达98.9%;进化树分析显示ORFV-FJND株与ORFV-YX株亲缘关系最近。通过Ex PASy软件中的Prot Scale、SOPMA、Signal P和TMHMM程序在线预测分析ORFV 115蛋白的亲疏水性、二级结构、信号肽及跨膜结构域。分析结果显示,ORFV 115基因编码的蛋白为亲水性蛋白,其二级结构包括α-螺旋（Hh）、β-折叠（Ee）、β-转角（Tt）及无规则卷曲（Cc）,以无规则卷曲为主,该蛋白无信号肽,无跨膜结构域。在此基础上,将ORFV 115基因亚克隆到pGEX-6P-1原核表达载体上,转化至大肠杆菌Rosettaganmi B（DE3）中进行诱导表达,确定温度为37℃、诱导表达时间为4 h、IPTG终浓度为1 mmol·L-1是ORFV 115重组蛋白的最佳诱导表达条件;SDS-PAGE结果表明,表达的蛋白大小约为42 kDa,与预期大小一致;重组蛋白可溶性分析结果显示该蛋白是以包涵体形式存在;应用包涵体蛋白纯化试剂盒纯化该重组蛋白,测定其浓度为0.823 mg·mL-1;SDS-PAGE结果显示为单一目的条带;纯化的目的蛋白经Western Blot鉴定正确,表明115蛋白表达成功,且具有良好的反应原性。成功构建了真核表达质粒pEGFP-N1-115,转染293T细胞,亚细胞定位结果显示,绿色荧光聚集在细胞核,提示该蛋白主要在细胞核中行使其生物学功能,这为进一步了解ORFV与宿主相互作用的机制奠定了基础。以纯化的ORFV 115重组蛋白作为包被抗原,通过反应条件优化,成功建立了检测ORFV抗体的间接ELISA方法。确定重组蛋白ORFV 115最佳包被浓度为2.0μg/孔,最佳血清稀释度为1:100,最佳酶标二抗稀释度为1:30000,最佳封闭时间为2 h,最佳血清、二抗作用时间均为45 min,最佳底物显色时间为10 min;该ELISA检测方法的特异性、灵敏性及重复性均良好;利用该方法对福州市、三明市和宁德市的327份临床样品进行检测,其ORFV抗体阳性率为87.46%。该研究结果为ORFV抗体检测提供了一种新的实用方法,为深入研究ORFV 115基因功能奠定了基础,对羊口疮的诊断和防治具有重要意义。