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研究背景:THAP(Thanatos-Associated protein)蛋白家族,因其N端共有一个在进化上高度保守的THAP锌指结构域而得名。许多THAP蛋白家族成员作为转录因子发挥作用,参与细胞的增殖、凋亡、血管生成等过程。THAP8是THAP家族的一个新成员,其表达和功能尚不清楚。本文主要研究THAP8基因的表达、调控及其功能。研究方法:通过TCGA数据库和Oncomine数据库的分析,发现THAP8在癌组织中的表达高于正常组织,然后利用荧光定量PCR分析了22对肺癌和癌旁组织中的THAP8的表达。利用Western blotting检测分析THAP8蛋白在人类正常肺细胞系Beas-2B和几种肺癌细胞系中的THAP8蛋白表达水平。利用过JASPAR软件分析,发现THAP8基因启动子区含有4个缺氧反应元件(HRE),然后利用荧光素酶实验和Co Cl2诱导缺氧实验,分析缺氧诱导因子α(HIF1α)对THAP表达的调控作用。利用慢病毒系统干扰THAP8基因的表达,采用MTT细胞增殖实验、划痕实验、克隆形成实验、侵袭实验等分析了THAP8基因沉默对肺癌细胞生物学行为的影响。研究结果:1)TCGA数据库和Oncomine数据库的分析及临床样本的分析,都表明THAP8的m RNA在癌组织中的表达显著高于正常肺组织。肺癌细胞系(H460、H1437、H446、H358,A549和95-D)中的THAP8蛋白明显高于正常肺细胞系Beas-2B。2)通过生物信息学分析发现THAP8基因启动子区有4个缺氧反应元件,由此推测HIF1α能促进THAP8的转录活性,并通过荧光素酶活性分析实验证明HIF1α对THAP8启动子活性有促进作用。此外,以Co Cl2诱导肺细胞系Beas-2B的化学缺氧模型中,发现随着Co Cl2浓度的增加,HIF1α的蛋白表达水平升高,且THAP8的蛋白表达水平也随之升高。这些结果都说明HIF1α能促进THAP8基因的转录。3)为了更进一步研究THAP8在在肺癌中生物学的功能,我们选用了H460细胞系和H1437细胞系,采用慢病毒干扰技术构建了干扰THAP8基因的稳定细胞株,细胞功能实验结果表明:在肺癌细胞中干扰THAP8基因可以显著抑制细胞的克隆形成能力和侵袭能力,但对细胞增殖能力和迁移能力没有显著影响。结论:1)THAP8在肺癌组织中高表达,而且其表达受HIF1α的正调控。2)THAP8促进肺癌细胞的克隆形成和侵袭。3)THAP8是一个癌基因。