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目的:利用神经肽CGRP、SP、NPY干预体外培养人OA软骨细胞,同时检测MMP-l、MMP-3、MMP-13的分泌。探索神经肽CGRP、SP、NPY对人OA软骨细胞增殖的同时是否抑制MMP-l、MMP-3、MMP-13的分泌。为探讨神经肽增殖软骨细胞,寻找OA的药物治疗提供理论基础。方法:1、采用II型胶原酶消化法处理人膝关节软骨标本从而取得大量高纯度的OA软骨细胞,采用II型胶原免疫组化法对所取得的OA软骨细胞进行鉴定,甲苯胺蓝染色法检测OA软骨细胞的存活率。2、分为实验组和对照组,分别用神经肽CGRP、SP、NPY对OA软骨细胞进行干预,对照组用等量PBS处理。采用MTT法检测各组细胞的增殖并绘制曲线。3、Ki67免疫法检测细胞增殖率。4、采用Westen Blot检测细胞MMP-l、MMP-3、MMP-13的表达。结果:1、OA软骨细胞体外培养后呈三角或多角等不规则形状,向四周爬行生长,并且前三代细胞基本上能较好的保持原有的细胞表型、形态及功能。2、在所测定的时间点内(3d、5d、7d)所测得的增殖神经肽CGRP、SP、NPY对OA软骨细胞均有增殖作用,其中20μm CGRP在第5天增殖达最高峰(1.048±0.181);20μm SP在第5天增殖达最高峰(1.132±.0537);50μm NPY第5天增殖达最高峰(0.806±0.115)。各组在所测定的时间点内(3d、5d、7d)均较空白组(P<0.001),差异显著。3、ki67免疫组化示软骨细胞呈椭圆形、梭形、多角形或者不规则形;棕色阳性颗粒包绕细胞核,空白对照组可见少量细胞内多核,处于分裂增殖状态。神经肽干扰组可见大部分细胞多核,处于分裂增殖状态。Ki67阳性率为空白组(0.265±0.031)x100%,CGRP组为(0.562±0.042)x100%、SP组为(0.558±0.036)x100%、NPY组为(0.649±0.055)x100%,较空白组差异显著(P<0.001)。4、west blot示神经肽处理细胞后与空白组对照比较,经过Quantity one图像分析。MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白相对表达量显著下调。其中MMP1蛋白相对表达量NPY组为1.744±0.238和CGRP组为1.562±0.346较空白组4.951±2.445下调显著,MMP3蛋白相对表达量CGRP组为1.432±0.823较空白组4.389±1.572下调显著,MMP13蛋白相对表达量NPY组为0.629±0.266和CGRP组为0.732±0.089较空白组3.182±3.129下调显著,神经肽各组较空白组差异显著(P>0.05)。结论:1、II型胶原酶一步消化法对于OA软骨细胞培养,可以获得稳定的OA软骨细胞。2、神经肽CGRP、SP、NPY对OA软骨细胞均有增殖作用,并且在第5天是可以达到最高峰,随着时间延长逐渐趋于稳定。3、神经肽CGRP、SP、NPY可以促进抑制MMP-1、MMP-3、MMP-13蛋白的产生,从而能阻止OA软骨细胞的凋亡,为治疗OA提供理论基础。