【摘 要】
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目的:通过建立微小核糖核酸-155（Micro RNA-155,mi R-155）基因缺陷小鼠和BALB/c小鼠的变应性鼻炎（Allergic rhinitis,AR）和对照组模型,进而探讨mi RNA-155在AR发病机制中对GATA3以及辅助性T淋巴细胞（Helper T lymphocyte,Th）中的Th1/Th2和2型固有淋巴细胞（Type2 innate lymphoid cells,
【基金项目】
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国家自然科学基金（81960186）:microRNA-155对GATA3介导鼻变态反应炎症中ILC2细胞的调控作用及其机制研究；
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目的:通过建立微小核糖核酸-155（Micro RNA-155,mi R-155）基因缺陷小鼠和BALB/c小鼠的变应性鼻炎（Allergic rhinitis,AR）和对照组模型,进而探讨mi RNA-155在AR发病机制中对GATA3以及辅助性T淋巴细胞（Helper T lymphocyte,Th）中的Th1/Th2和2型固有淋巴细胞（Type2 innate lymphoid cells,ILC2）的调控趋势,进一步探索变应性鼻炎的复杂发病机制,为今后AR的诊疗提供一定的理论依据。方法:（1）外购mi R-155基因敲除小鼠和BALB/c野生型（Wild type,WT）小鼠,分别用卵清蛋白（Ovalbum,OVA）和磷酸缓冲盐溶液（Phosphate buffered saline,PBS）建立小鼠的AR模型和对照组模型,每组8只;（2）最后一次激发后将每只小鼠称重并观察每只小鼠抓鼻、喷嚏和流涕等行为学变化30分钟;（3）取小鼠鼻部组织制作病理切片,进行苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色和碘酸雪夫（Periodic acid-schiff,PAS）染色,观察每组小鼠鼻黏膜嗜酸性粒细胞和杯状细胞的数量以及鼻黏膜上皮纤毛排列的状态;（4）收集小鼠内眦静脉血,离心后取上层血清,进行酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Irnnluno Sorbent Assay,ELISA）检测,计算小鼠静脉血中白介素13（Interleukin-13,IL-13）、IL33、OVA特异性免疫球蛋白E（Ovalbum secretion immunoglobulin E,OVA s Ig E）和γ干扰素（Interferon-γ,IFN-γ）的浓度;（5）剥离小鼠鼻黏膜并提取核糖核酸（Ribonucleic,RNA）,进行逆转录及扩增,对比各组间鼻黏膜中mi RNA-155、GATA3、IL13以及IFN-γ的相对表达量;（6）制备小鼠脾脏的单细胞悬液,运用流式细胞术检测Th1/Th2的比例以及ILC2的占比。结果:（1）经过观察最后一次滴鼻激发后对小鼠称重及观察行为学变化,得出小鼠的组间体重差异对研究指标无明显影响（P＞0.05）,AR组的抓鼻、喷嚏的次数以及流涕的行为学评分相比mi RNA-155基因敲除组和对照组差异具有显著差异（P＜0.05）;（2）AR组小鼠鼻部HE染色切片的嗜酸性粒细胞计数较mi RNA-155基因敲除小鼠和对照组浸润明显增多,差异具有统计学意义（P＜0.05）,而且AR组的纤毛排列紊乱、中断,PAS染色切片发现,AR组小鼠的杯状细胞分化较mi RNA-155基因敲除小鼠和对照组亦具有显著差异（P＜0.05）;（3）ELISA检测结果,AR小鼠静脉血中IL13、IL33和OVA s Ig E的浓度较mi RNA-155基因敲除组和对照组升高,而AR组的IFN-γ血清浓度较对照组低,稍高于mi RNA-155基因敲除组;（4）AR组小鼠鼻黏膜的mi RNA-155、GATA3和IL13的表达的升高均较mi RNA-155基因敲除组和对照组增强,而AR组的IFN-γ的表达较其余两组低;（5）小鼠脾脏单细胞流式细胞术检测,AR组的Th2细胞和ILC2细胞的比例较mi RNA-155基因敲除组和对照组高,而Th1数量比例较对照组低,高于基因敲除组,即AR组的Th1/Th2比值低于对照组和基因敲除组。结论:（1）在AR中,mi RNA-155可能促进CD4+T细胞向Th2优势分化,使得Th1/Th2比例降低,同时也使得ILC2的分化增强,促进Th2型细胞因子生成和AR的发生发展;（2）敲除mi RNA-155可以抑制GATA3的表达以及CD4+T细胞向Th2和ILC2的优势分化,减轻AR症状。
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