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背景和目的：血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells，VSMC）是血管壁的主要细胞成分之一，也是决定血管反应性和血管构型的重要因素。高血压阻力血管结构变化主要是由于VSMC增殖和肥大，这是引起外周阻力升高的主要原因。因此在临床防治高血压中，首先面临的主要问题是如何控制VSMC结构和功能的异常变化。血小板源生长因子（Platelet-derived growth factor，PDGF）是一种重要的促细胞分裂剂，可以刺激多种细胞分裂和增殖，是VSMC存活所必需的。PDGF与其跨膜性酪氨酸激酶受体（α、β）结合，引起一系列的信号传递，最终参与VSMC的增殖反应，其中α受体可与PDGF所有二聚体（AA、AB、BB）结合，而β受体只与PDGF-AB、BB结合，故其作用似较β受体更为重要。PDGF受体介导的细胞内一系列信号转导，是调控VSMC增殖、肥大及血管重构的关键环节，其中[Ca2+]i编码的信息调控处于中枢地位，发挥调控细胞增殖的枢纽作用。因此，本实验应用原代培养高血压大鼠（spontaneously hypertension rats，SHR）／Wistar-VSMC模型，观察：1．PDGF-A及其α受体在不同大鼠（SHR／Wistar）来源VSMC中表达的差异性；2．PDGF-AA对不同大鼠（SHR／Wistar）来源VSMC增殖、肥大的影响；3．切除PDGF-α受体基因对大鼠VSMC增殖、肥大的影响；4．[Ca2+]i信号及酪氨酸激酶途径在PDGF促SHR-VSMC增殖、肥大中的作用。不仅能对高血压血管重构的发病机理进行更深一步的探索，而且为进一步开展血管增生性疾病的基因治疗提供有益的启示。 方法和技术路线：应用原代培养SHR／Wistar-VSMC，采用Western blot、RT-PCR、流式细胞仪检测、3H-TdR及3H-Leu掺入率等测定方法，观察： 博士研究生论文 血小板源生长因子－AA及其Q受体在高血压大凤血叮平滑肌细胞增疤肥大中的作用 1．PDGF－AA对SHR／W i star－VSMC增殖、肥大的影响：与Wstar－VSMC相卜：①SHR－VSMC中’H－Leu、’H－TdR掺入率明显增力，在 2－20ng／ml浓度范围内随＊＊＊L＊A浓度的增加而增高，P＜0刀卜 ②S＊L＊8＊C中PCNA表达明显增高，在2上0ng／ml浓度范围内，随PDGF－AA浓度的增加而增高，P＜0刀1而Wstar－VSMC无明显变化，P＞0刀5；＠SHR－VSMC细胞生长周期发生显著变化，在5上0ng／ml浓度范围内，随PDGF－AA浓度的增加 S期细胞百分率呈剂量依赖性增高，G外GI期细胞百分率呈剂量依赖性降低，P＜0刀1，而WStar－VSMC在PDGF－AA刺激下，细胞生长周期与对照组相比无明显变化；＠SHR－VSMC 中转录调节因子 c－myb儿－myCmRNA表达明显增高，在5上0ng／ml浓度范围内，随PDGF－AA浓度的增加而增高，P＜0．01，而WStar－VSMC与对照组相比无明显变化。 2．切除PDGF－Q受体基因对Sng－VSMC 增殖、肥大的影响：在PDGF－AAO0ng／ml束檄下，切除PDGF－口受体基因后：①SHR－VSMC中’H一Leu、3H一TdR掺入率显著减少，P＜0刀1，anti一PDGFR a单克隆抗体p5ug／ml)也使3HLCll、‘H1dR掺入率明显减弱，p＜0刀1，而空载体对照组Ads上09对［’H］掺入无影响，p＞0．05；②SHRNSMC中 pCNA表达与对照组相比显著减少 P＜0．of；③SHR－VSMC中 S期细胞数明显减少，而 GO／GI期细胞数增加，P＜0刀1；④SHR－VSMC中转录调节因子 c－myc儿－myb mRNA表达显著减少，P＜0刀1；⑤在PDGF－AA刺激下，切除PDGF－口受体基因后S＊R．VS＊C胞浆内C＜卜浓度显著减少，P＜0刀1。 3．酪氨酸激酶抑制剂 gen i ste i n对 SHR－VSMC增殖、肥大的影响：在PDGF叭Ap0ng加时u激下，加入不同浓度酪氨酸激酶抑制剂后：①、1dR、’H＊eu掺入率明显降低，在 0．11／ml浓度范围内呈剂量依赖性减少，P功．of：②SHRNSMC 中 PCNA表达与对照组相比显著降低，在0．11 onmol／ml浓度范围内 PCNA表达呈剂量依赖性减少，P＜00；③SHRJSMC中 S期细胞数明显减少，在 0．1刁／ml浓度范围内抑制由G。期进入S 期的细胞数，P＜0刀1；④S＊卜＊S＊C 中转录调节因子c－myb止－myc mRNA表达与对照组相比显著减少，在 0．11 onmol／ml浓度范 ·Vlll· 博士研究生论文 血小板源生长因子叭A及其。受休在高血压大鼠血管平滑肌细胞邀疽肥大中的作用 围内 C－Cyb儿－CyC mRNA表达呈剂量依赖性降低，P＜0刀 1。 4．钙通道阻断剂 n i mod p i ne对 SHR－VSMC增殖、肥大的影响：在不 同浓度PDGF－AA刺激下，SHR－VSMC胞内K／勺i浓度显著升高，在 2【0ng／ml浓度范围内呈剂量依赖性增强o＜0刀1X 而在PDGF－AA刺激下 WistarVSMC胞内m／勺浓度无明显变化o＞0．05)；在 10”Md”‘M浓度范 围内，不同剂量的 Nimodipine＊0”‘M，10”’M，10”6M)呈剂量依赖性抑制 PD＊F．＊A介导的VS＊C胞内Ka’勺浓度升高（P＜0刀1）。 在 20ng＊l浓度的 PDGF－AA刺激下：①SHR－VSMC中 3H－Leu户H。TdR 掺入率与对?