水稻叶绿体基因组序列的拼装验证和多态性分析

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:talentcheng
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在对超级杂交水稻“两优培九”的父本93-11和母本培矮64S采用鸟枪法进行核基因组测序的过程中,积累了大量的细胞质基因组序列。以国际上已经发表的水稻日本晴(Nipponbare)叶绿体基因组序列为基础,用Blast从培矮64s和93-11的测序数据库中调出同源序列各5万余条。通过Phrap软件,用这些序列组装了完整的培矮64S和93-11叶绿体基因组序列。研究结果发现:1.培矮64s叶绿体基因组大小为134,559bp,93-11叶绿体基因组为134,505bp,与已知的日本晴叶绿体基因组(大小为134,525bp)存在长度差异。2.通过分子生物学实验方法论证了组装策略的正确性。3.通过序列比较分析了培矮64S和93-11与日本晴的叶绿体基因组的单核苷酸多态性(SNP)和多碱基插入缺失(InDel)变化。4.通过设计引物进行PCR扩增,验证了在日本晴、培矮64S和93-11之间存在的三个片段69bp、32bp和15bpTnDel插入缺失变化。证明了在93-11中69bp缺失和32bp重复是真实存在的。15bp的差异则可能是由于日本晴叶绿体基因组原序列的拼接错误引起的。5.设计引物并选取27个材料对这两个片段差异进行PCR扩增。结果发现69bp片段缺失与否与材料的籼粳属性有关(只有窄叶青除外),32bp带型与69bp带型相关。研究结果印证了前人的结论,即69bp的片段差异的确与籼稻和粳稻分化有关系。山于32bp与69bp片段的带型相关,说明32bp片段差异也与籼粳分化有关系。6.对水稻三个材料的叶绿体基因组GC含量分析表明,材料间GC含量差异较小:93-11为39.00%;培矮64S为38.52%;日本晴为38.99%。这表明可能在水稻亚种间叶绿体基因组在DNA组分上也是非常保守的。7.三个材料叶绿体基因组中分别预测到339、332、328个ORF区,其中非重叠的ORF均为40个,最长的ORF有4,626 bp,与其他物种差异很大。
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