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银杏叶中类黄酮具有很高的药用价值,但传统栽培模式下,银杏叶中总黄酮含量和质量较低,严重影响银杏叶片药材的市场价格和农民收入。因此,研究提高银杏类黄酮的调控措施具有重要的实践价值。尽管前人通过栽培调控、品种选育或施加外源处理(如无机硒处理)等手段取得了一定成效,但距离高质量银杏叶片的生产还有差距,调控过程的分子机理需要深入探究。本研究拟采取不同的外源硒肥处理,研究其对银杏生理生化指标、主要活性成分黄酮类物质含量的影响,并通过转录组测序数据,分析施硒后银杏黄酮类代谢途径中相关基因的表达量变化,以期揭示不同硒处理影响银杏叶黄酮类物质含量变化的分子机理。具体研究结果如下:1.不同硒处理对银杏生理生化指标的影响。不同时期、不同浓度生物纳米硒对银杏叶相关生理指标的影响效果不同。生物纳米硒能够显著提升银杏叶中叶绿素的含量,尤其在7月时,1.6 mmol·L-1处理组银杏叶对叶绿素的提升效果最显著;9月份时,0.4 mmol·L-1处理组银杏叶的可溶性糖含量达到最高,相比对照组差异显著;10月份时,1.6 mmol·L-1处理组银杏叶的可溶性蛋白含量为所有处理组最高,相比对照组差异显著;7月份时,0.8 mmol·L-1处理组的淀粉含量为所有时期和处理组之最高,相比对照组差异显著;综合以上,生物纳米硒在浓度1.6mmol·L-1为最佳,相比对照组,各指标在7月和9月有显著提高。2.不同硒处理对银杏叶黄酮含量的影响。不同时期,不同硒肥处理对银杏黄酮含量影响不同。与对照组相比,生物纳米硒有显著提升作用,在7月和9月份时,1.6 mmol·L-1处理组的黄酮含量为所有组别中的最高,相比对照组差异显著;0.4mmol·L-1有机硒处理组的黄酮含量为所有处理别中的最高,与对照组相比,提升黄酮含量效果具有显著性差异;而无机硒处理组出现明显抑制现象。综合以上,3种硒肥处理组中,以生物纳米硒为最佳,浓度以1.6 mmol·L-1最佳,采摘时期以7月和9月最佳。3.不同硒处理对银杏叶黄酮合成途径相关代谢基因的影响。将纳米硒、有机硒、无机硒和对照组差异最大组样品分别提取总RNA,通过RNA-Seq检测不同硒处理对相关基因的表达影响。测序结果分析表明,纳米硒能促进PAL、COMT、CAD、F6H基因表达水平提高;有机硒促进CCR、HCT基因上调,并同时抑制FMO的表达水平;无机硒促进C3’H、CCo AOMT、CYP、DFR、HCT基因上调,并同时促使BGL、UDPglucose基因下调。不同硒处理对黄酮合成相关基因表达水平的影响不同,因此银杏叶的黄酮含量在不同组别中表现出差异。综上所述,硒处理不同,对银杏叶片黄酮含量影响不同。其中纳米硒处理对银杏叶黄酮含量提升最大,分别在7月和9月达到两个最高峰,延长了银杏叶分批采收时间,可以提高年总银杏叶采收量;生物纳米硒处理提高了银杏叶叶绿素含量,促进了光合产物的积累,淀粉、可溶性糖、可溶性蛋白质等含量有提高,且差异显著;生物纳米硒能促进黄酮合成途径中PAL、COMT、CAD、F6H等基因的表达量升高,关键基因和酶水平的升高促进了总黄酮含量的升高。因此,合适浓度的有机硒和纳米硒能促进银杏黄酮含量的升高,有利于叶用银杏栽培产业的品质提升,提升我国银杏叶出口创汇竞争力,也为富硒药用植物栽培提供了理论支撑。