Rex(Redox regulator，Rex)是第一个直接响应胞内NADH/NAD+平衡的转录调节因子，广泛存在于革兰氏阳性菌中，最先在天蓝色链霉菌中发现。Rex调节系统作为新近发现的一种胞内氧化还原状态调节机制，对其研究并不是很多。为此，本文对土霉素生产菌--龟裂链霉菌(S.rimosus)M4018中的Rex进行基因克隆、表达和生物学活性研究。　　 从S.rimosus M4018基因组中克隆到rex基因，测序后经过NCBI的BLAST比对发现是Rex蛋白家族中新的一员，命名为Sr-Rex。与链霉菌属的其他已报导菌中的rex基因有较高的同源性，如Streptomyces coelicolor A3(2)，84％，Streptomyces avermitilisMA-4680，84％，Streptomyces griseus，80％，Streptomyces lividans TK24，71％，获得GenBnak登录号：GQ849479。序列分析表明rex基因编码281个氨基酸的多肽，推测其分子量大约为29.2kDa，等电点为5.17。利用TaRaKa Genome Walking Kit克隆得到与Rex相互结合作用的部分操纵子DNA(Rex operator，ROP)序列，该ROP核苷酸序列比对发现其与S.coelicolor中ROP完全一致。　　 为了体外得到Sr-Rex蛋白，构建重组表达菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-rex(his-Tag)，并通过对培养基、最适诱导时间、IPTG最佳浓度、最适诱导温度等表达条件的一系列优化，确定Sr-Rex蛋白的最佳表达条件：菌浓OD600达到约0.5时，添加诱导剂IPTG浓度0.5mmol/L，在37℃和220rpm振荡培养5h。通过镍柱亲和层析和阴离子交换层析，得到纯度达99％的Sr-Rex蛋白，测得浓度为2.35mg/mL。　　 进一步，通过合成不同长度的ROP寡核苷酸与Sr-Rex进行生物活性结合试验，EMSA结果证实ROP必须是一段完整的反向重复序列，缺失任何一臂都会使其失去结合活性，并确定与Sr-Rex结合活性最核心的ROP序列为：CATCTTGTGCACGCGTTCACAAAGACA。同时，通过一系列EMSA试验表明Sr-Rex蛋白能特异性结合ROP序列，但两者的结合受NADH的浓度影响，NADH浓度越高两者的结合越差，但NAD+则几乎不影响两者的结合。