柞蚕(Antheraea pernyi)部分品种的RAPD分析

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kuyedie222
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该文以柞蚕蛹、卵为材料,采用RAPD标记技术,对柞蚕生产上的部分品种及杂交种进行了遗传差异研究.结果如下:一、柞蚕蛹模板DNA的提取,以蛹为材料,对几种提取方法进行了比较研究,并对其中一种方法的关键技术加以改进,结果表明:采用改进的方法提取DNA,可以省去蛋白酶K和RNA酶的消化步骤,以此DNA为模板进行PCR,对RAPD分析的结果没有影响.二、该论文对PCR的反应条件进行了优化,探索出了产物量和重复性较好的反应程序;对不同厂家的琼脂糖和不同浓度的凝胶也进行了比较,发现不同产地琼脂糖和不同浓度的凝胶对检测效果影响很大,选择一种在成像仪下效果较好的琼脂糖和最优浓度的凝胶,优化后的反应程序为:94℃预变性60s,然后以94℃变性30s,40℃退火60s,72℃延伸90s,进行40个循环,最后72℃下延伸10min.1.4﹪的琼脂糖凝胶电泳,EB染色后在EAGLE EYEⅡ凝胶影像仪观察并拍照.三、采用Tree.conw.1.3版本软件对柞蚕蛹DNA的RAPD分析结果进行了聚类分析,结果表明:供试的柞蚕品种没有按体色系统聚集在一起,而是按品种来源的不同而聚集在了一起,来自山东省烟台市方山蚕种场保育的5个品种-胶蓝、烟6、青黄、方山黄1号、789聚在了一起,表明它们之间的亲缘关系较近;来自沈阳农业大学保育的品种-青6号、选大1号、黄蚕聚在了一起,说明青6号和选大1号这两个青黄蚕系统的品种亲缘关系较近.四、应用RAPD的标记技术对柞蚕品种及杂交种卵DNA进行了RAPD分析,结果表明,个别引物是有效的并有可重复性,可以用做品种纯度鉴定.
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