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本文采用原代培养的大鼠前体脂肪细胞,通过胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和表皮生长因子(EGF)进行处理,研究上述两种因子对大鼠前体脂肪细胞增殖和分化的影响。 选择健康的20日龄SD雄性大鼠,无菌条件下取腹股沟、附睾和肾脏周围的脂肪组织,消化获得前体脂肪细胞进行原代培养。培养基选用10%胎牛血清(FBS)的M199培养基,培养条件为5%CO2、37℃、饱和湿度。 研究中采用细胞计数、细胞生长曲线绘制、细胞倍增时间测定、MTT比色的方法研究细胞的增殖情况;用油红O染色、HE染色和Giemsa染色进行形态学观察,用油红O染色提取法和充脂细胞率测定研究前体脂肪细胞的分化,并测定了不同培养时期大鼠前体脂肪细胞中蛋白质的含量。 研究在本实验条件下(不使用胰岛素,10%FBS),探寻IGF-I与EGF对大鼠前体脂肪细胞增殖的最佳作用浓度。80ng/mL IGF-I和50ng/mL EGF对大鼠前体脂肪细胞的促进增殖作用最为显著,细胞倍增时间由对照组的67.49小时分别降低到44.24小时和48小时,为促进大鼠前体脂肪细胞增殖的最佳浓度。IGF-I与EGF在对大鼠前体脂肪细胞增殖促进中,表现出明显的协同作用,并且这种协同受到生长因子浓度和前体脂肪细胞的培养时间的影响。 IGF-I具有促进大鼠前体脂肪细胞分化作用,0~10d添加80ng/mL IGF-I使油红O染色提取法结果OD值上升,充脂细胞率上升。EGF对大鼠前体脂肪细胞分化具有抑制作用,0~10d添加50ng/mL EGF可以降低油红O染色提取法结果OD值和充脂细胞率。0~7d添加80ng/mL IGF-I,7~10d添加50ng/mL EGF组具有明显的促进分化作用;0~3d添加80ng/mL IGF-I,3~10d添加50ng/mL EGF组具有显著的抑制分化作用,说明3-7天是IGF-I和EGF对大鼠前体脂肪细胞分化产生作用的关键时期。IGF-I与EGF在对大鼠前体脂肪细胞分化的作用中,两者之间没有明显的协同或拮抗作用。 80ng/mL IGF-I可以提高培养6d前体脂肪细胞的蛋白含量,50ng/mL EGF对6d细胞蛋白含量无显著影响。实验首次发现在前体脂肪细胞培养过程中,细胞比重会随前体脂肪细胞培养时间的推移而逐渐地下降,甚至会出现部分细胞无法离心沉淀的情况。80ng/mL IGF-I具有促进前体脂肪细胞比重下降的作用,50ng/mL EGF对其无显著影响。