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猪精子的抗冻性较差,在冷冻解冻过程中容易受到活性氧(ROS)增多引起的脂质过氧化损伤。为了提高冷冻-解冻后猪精子质量,探索抗氧化剂对冷冻保存猪精液的保护作用,本试验以长白公猪为试验对象,在精液冷冻稀释液中添加超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、褪黑素(MLT)、谷胱甘肽(GSH)等抗氧化剂,采用0.5 ml细管精液冷冻剂型对猪精液进行冷冻；并检测解冻后精子活力、质膜完整性、顶体完整性及DNA完整性,以评价猪精液冷冻效果。同时探索精子染色质扩散实验(SCD)检测冷冻保存猪精子DNA完整性所适合的实验条件,应用于试验中精子DNA完整性检测,并探讨SCD试验结果与精子活力、质膜完整性、顶体完整性的相关性。试验表明,采用的裂解液配方为：Tris 0.2 mol/L; NaCl 2.5 mol/L; DTT 0.2 mol/L; Triton X-100 1%的SCD实验可以检测冷冻-解冻后猪精子DNA完整性。冷冻稀释液中分别单独添加SOD 200 U/mL、CAT 200 U/mL、MLT 0.05 mg/mL、GSH 0.5 mg/mL,能够显著提高精子活力、质膜完整性、顶体完整性及DNA完整性(P<0.05)。联合添加SOD和CAT的最佳浓度为SOD 100 U/mL X CAT 200 U/mL,精子活力及质膜完整率极显著高于两种抗氧化剂单独添加的效果(P<0.01),DNA完整率有显著提高(P<0.05),在顶体完整率上无显著差异(P>0.05)。联合添加MLT和GSH的最佳浓度为MLT 0.05 mg/mL×GSH 0.5 mg/mL,精子活力及顶体完整率都显著高于两种抗氧化剂单独添加的效果(P<0.05),在质膜完整率及DNA完整率上无显著差异(P>0.05)。联合添加SOD×CAT与联合添加MLT X GSH相比较,前者质膜完整率显著高于后者(P<0.05),后者顶体完整率显著高于前者(P<0.05),在活力和DNA完整率上无显著差异(P>0.05)。冷冻-解冻后猪精子DNA完整性与精子活力高度相关(r=0.670,P<0.01)；与质膜完整性相关系数为0.639(P<0.05)；与顶体完整性呈低度相关(r=0.468,P>0.05)。因此,在猪精液冷冻稀释液中联合添加SOD 100 U/mL和CAT 200 U/mL或联合添加MLT 0.05 mg/mL和GSH 0.5 mg/mL,均能提高冷冻-解冻后精子质量,减少精子DNA损伤；本试验建立的SCD可以作为检测猪冷冻保存精子DNA完整性的有效方法。