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卵巢是动物生命周期的初始环境,其中发生着持续的自动修复,而这个动态反馈体系的稳定源于卵泡内细胞增殖与凋亡的循环,其中涉及的内分泌信号通路包含多种激素、激素受体和细胞因子。在哺乳动物卵巢组织中,肝受体同系物-1(LRH-1)在颗粒细胞和黄体细胞中通过调控细胞色素P450家族表达,影响雌激素与孕酮的分泌,同时促进卵泡发育和维持排卵过程。然而,LRH-1对家禽繁殖功能的影响,尤其是对就巢个体的影响尚未报道。因此,研究LRH-1对家禽繁殖性能的调控作用具有重要的意义。四川山地乌骨鸡黄羽系就巢性强,产蛋量少,产蛋率低,其总体繁殖力不高,因而影响了种禽的经济效益和产业发展。本试验从30周龄四川山地乌骨鸡黄羽系中选取有就巢行为的母鸡80只,并以40只正常产蛋母鸡作为对照,研究群体就巢期的生理特征;分析LRH-1在就巢和非就巢个体卵泡颗粒层中的表达差异。随后选取10只30周龄罗曼蛋鸡,通过分离培养卵泡颗粒细胞研究LRH-1对颗粒细胞发育的影响;探索LRH-1对卵泡选择与卵泡成熟过程所起的关键性的作用,以期阐明LRH-1对颗粒细胞增殖、凋亡的调控机制。本研究主要结果如下:(1)就巢期表型数据测定结果显示,与产蛋鸡体重与采食量(分别为2.4 kg与113g/d)相比,鸡就巢期体重、采食量随就巢时间的增加持续下降(就巢14 d分别为2.0 kg与67 g/d),而就巢第7 d体温明显下降(由42℃降至41.7℃),但随后恢复至正常水平。(2)利用荧光定量PCR分析LRH-1基因在黄羽山地乌骨鸡不同阶段卵泡颗粒层中的表达水平,发现LRH-1在产蛋鸡各等级卵泡与小黄卵泡颗粒层中均有表达,在就巢期小黄卵泡中没有表达,并且在F1与F6卵泡中的表达量显著高于其他卵泡(P<0.05)。调控孕酮合成的细胞色素P450家族11亚家族A多肽1(CYP11A1)的表达模式与调控雌激素合成的细胞色素P450家族19亚家族A多肽1(CYP19A1)相反,CYP11A1在F1卵泡的表达水平最高,在产蛋与就巢期小黄卵泡中均没有表达;而CYP19A1在F1检测不到表达,但在产蛋期小黄卵泡有表达,同时在F6卵泡高表达。(3)在体外培养罗曼蛋鸡卵泡颗粒细胞过程中,通过流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡率发现,干扰LRH-1后36 h,与阴性对照组相比,抑制LRH-1可显著增加颗粒细胞的早期以及晚期凋亡率(对照组:5.2%与5.0%;转染组:14.1%与13.5%,P<0.05),荧光定量PCR检测到凋亡相关基因Bcl-2和p53基因mRNA的相对表达量显著减少(P<0.05)。干扰24 h后,通过酶联免疫分析法检测细胞培养基中的生殖激素浓度,结果显示雌激素与孕酮浓度显著减少(P<0.05)。(4)随后利用LRH-1过表达载体转染颗粒细胞,通过CCK-8法检测颗粒细胞增殖情况。结果发现,过表达LRH-1能够极显著促进转染24h时的颗粒细胞增殖(阴性对照组OD=1.8;转染组OD=1.2,P<0.01),并且作用效果随持续时间逐渐增强。本试验中,转染处理24 h时,相比对照组,颗粒细胞增殖细胞核抗原(PCNA)与B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因显著增加(P<0.05)。综上所述,LRH-1主要在产蛋鸡F1与F6卵泡颗粒层中表达,在就巢期卵泡没有表达,该基因在鸡卵泡发育过程中发挥促进细胞增殖的作用。此外,LRH-1能够通过促进雌二醇、孕酮的合成抑制鸡卵泡颗粒细胞凋亡。