布鲁氏菌病(Brucellosis)是由胞内寄生的革兰氏阴性菌布鲁氏菌引起的一种人畜共患病,主要引起家畜死胎、流产、不孕等症状,不仅影响畜牧业的发展,还可导致巨大的经济损失和严重的公共卫生问题。本研究以我国广泛使用的山羊痘弱毒疫苗株为亲本病毒,构建含布鲁氏菌保护性抗原omp31和omp2b的重组山羊痘病毒,以期获得针对布鲁氏菌病的免疫性强的重组羊痘病毒,为布鲁氏菌病、羊痘的预防提供理论基础。根据GenBank登录的羊种布鲁氏菌omp31和omp2b基因序列,分别设计引物,PCR扩增得到omp31和omp2b基因,酶切、测序鉴定其正确性。将鉴定正确的omp31和omp2b基因克隆到GTPV(Goat poxvirus)重组载体pGM-TK-P11-GPT1上,构建含有布鲁氏菌omp31和omp2b基因的重组山羊痘病毒转移载体。将构建好的这两个山羊痘病毒转移载体与GTPV疫苗株G14-STV44-55共转染绵羊睾丸细胞,筛选、鉴定重组病毒rGTPV株,并对该重组病毒的细胞裂解物表达的OMP31和OMP2b蛋白进行Western blot检测,利用间接ELISA来检测rGTPV株免疫小鼠后其体内IgG抗体水平。本实验获得了稳定表达布鲁氏菌OMP31和OMP2b蛋白的重组山羊痘病毒株G14-STV44-55-BOMP31和G14-STV44-55-BOMP2b;Western blot检测表明重组山羊痘病毒表达的OMP31和OMP2b蛋白具有免疫反应性;rGTPV株免疫小鼠试验表明该重组病毒表达的OMP31和OMP2b蛋白能产生相应的抗体,具有一定的免疫原性。本实验为进一步开展GTPV活载体疫苗的研制及相关基础研究提供了技术平台。