目的研究心钠素(atrial natriuretic peptide ,ANP)及其受体(natriuretic peptide receptor ,NPR)在原代培养的大鼠耳蜗血管纹(stria vascularis,VS)边缘细胞(marginal cell, MC)是否表达,并探讨其意义。方法利用新生1-3天SD大鼠的耳蜗血管纹组织作MC体外原代培养,用倒置显微镜观察原代培养的MC的细胞形态,排列方式,生长方式,用选择性消化法纯化MC,用免疫细胞化学方法检测MC中细胞角蛋白-18(CK-18)表达情况,鉴定所培养细胞是否为MC。用免疫细胞化学方法检测原代培养MC中ANP及NPR-A表达情况。应用RT-PCR方法检测原代培养的MC中是否具有编码ANP及其受体NPRs的mRNA存在。结果细胞培养:利用新生1-3天SD大鼠的耳蜗血管纹组织培养出MC,培养细胞CK18表达阳性,表明所培养细胞为上皮来源的血管纹边缘细胞。扫描电镜观察:原代培养的MC成扁平多角的外观,表面有许多微绒毛,并可见分泌囊泡,也可见囊泡排出后的“洞口样”结构。ANP免疫反应颗粒在MC中的表达:原代培养3天的MC中可见到大量棕褐色心钠素反应阳性颗粒,以细胞核周围和核两极处为多,也可见分散或成团的颗粒,位于胞浆中,离核越远颗粒越少,有少数颗粒呈弥散分布和细胞膜下分布。NPR-A免疫反应颗粒在MC中的表达:原代培养3天的MC细胞膜可见到大量棕褐色NPR-A反应阳性颗粒,围绕细胞呈环状,胞膜游离面无NPR-A阳性反应颗粒。ANP及NPR mRNA的表达情况:培养2周的MC提取的RNA扩增出ANP及NPR目的条带,用凝胶成像及定量扫描仪测得ANP片段大小269bp(图10),NPR-A片段大小454bp,NPR-B片段大小408bp,NPR-C片段大小208bp,为目的基因片段。结论本实验结果表明MC具有合成ANP的能力,其分泌的ANP可能通过旁分泌或自分泌的方式作用于MC的NPR,进而调节MC的状态和功能,来维持内耳微环境的稳定,同时,本实验也为进一步应用细胞膜片钳技术研究心钠素对MC离子通道的作用及其机制奠定了形态学基础。