植物乳杆菌β-D-葡萄糖苷酶的胞内定位及性质研究

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香气是葡萄酒风味及质量的重要影响因素,葡萄酒中的香气物质主要以游离态和结合态两种形式存在。其中,占优势地位的结合态香气物质本身不能释放香气,只有通过糖苷水解才能释放出可被感知的游离态挥发性香气物质。β-D-葡萄糖苷酶是糖苷水解的关键酶,然而目前对其研究多致力于乳酸菌中的酒酒球菌。但是,有人发现植物乳杆菌同样具有β-D-葡萄糖苷酶活性,甚至其酶活比酒酒球菌的更高。此外,一些研究者也指出,植物乳杆菌有潜在的启动苹果酸乳酸发酵的能力,可作为下一代苹果酸乳酸发酵的发酵剂。本论文以对硝基苯基-β-D-葡萄糖苷(pNP-G)为底物,利用酶活比对,从5株不同来源的植物乳杆菌中筛选出3株高β-D-葡萄糖苷酶酶活菌株,并对该酶进行了细胞定位及活性分析;在此基础上,研究了葡萄酒条件参数下3株植物乳杆菌的生长及产酶情况,利用综合因素影响筛选出最适酿酒菌株;最后,对该酿酒菌株的β-D-葡萄糖苷酶的酶学特性进行了分析。主要研究结果如下:(1)植物乳杆菌520、XJ-25、XJ-14的β-D-葡萄糖苷酶是胞内酶,大部分为不可溶性蛋白,主要存在于原生质体膜结构上;部分为可溶性蛋白,存在于周质腔和细胞质液中。此外,β-D-葡萄糖苷酶的最适产酶培养基为改良MRS培养基。该酶虽同属于组成型酶,但在纤维二糖及熊果苷诱导下,其酶活有不同程度提高。(2)植物乳杆菌520、XJ-25、XJ-14的β-D-葡萄糖苷酶在各酿酒条件下酶活均受到抑制,仅在不同SO2浓度下其酶活无显著影响。但在综合因素下植物乳杆菌XJ-25生长良好且所产β-D-葡萄糖苷酶活性最高,故其有作为葡萄酒酿造优良菌株的潜力。(3)植物乳杆菌XJ-25的β-D-葡萄糖苷酶最适温度为45℃,最适pH为5.0,且其耐热性一般,耐酸性较强。不同金属离子对其作用不一,葡萄糖、果糖及葡萄酒中相关有机化合物对该酶也表现出抑制作用。此外,该酶对底物pNP-G亲和力较强。
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