【摘 要】
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目的:阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis,Tv）是一种有鞭毛的寄生原生动物,是最常见的非病毒性性传播疾病（sexually transmitted disease,STD）。阴道毛滴虫主要感染女性的阴道、尿道和外阴部位,以及男性的尿道和前列腺中,引发滴虫病。其临床症状主要为引起机体阴道炎、尿道炎、盆腔炎、宫颈炎、前列腺炎及其他不良后果。目前对于Tv触发炎症过程的机制尚不明确。本
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目的:阴道毛滴虫（Trichomonas vaginalis,Tv）是一种有鞭毛的寄生原生动物,是最常见的非病毒性性传播疾病（sexually transmitted disease,STD）。阴道毛滴虫主要感染女性的阴道、尿道和外阴部位,以及男性的尿道和前列腺中,引发滴虫病。其临床症状主要为引起机体阴道炎、尿道炎、盆腔炎、宫颈炎、前列腺炎及其他不良后果。目前对于Tv触发炎症过程的机制尚不明确。本研究旨在探讨阴道毛滴虫分泌的巨噬细胞迁移抑制因子（macrophage migration inhibitory factor,MIF）对THP-1巨噬细胞的作用及其机制,为TvMIF的生物学功能及宿主-寄生虫相互作用的研究提供理论支撑。方法:1.TvMIF蛋白的原核表达并纯化,用SDS-PAGE电泳鉴定纯化后的TvMIF蛋白。鉴定后用液相内毒素清除剂试剂盒去除内毒素,并用鲎试剂内毒素检测试剂盒检测内毒素去除效果。2.建立TvMIF刺激THP-1巨噬细胞模型,CCK-8法检测TvMIF对THP-1巨噬细胞的毒性,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况和活性氧（ROS）情况,q RT-PCR检测NLRP3、caspase1、IL-1β、IL-18 mRNA表达水平的变化。3.TvMIF刺激THP-1巨噬细胞后,Western blot法检测细胞里caspase1、NLRP3、GSDMD及GSDMD-NT、pro-IL-1β蛋白表达水平的变化及MAPK和NF-κB信号通路的激活情况。结果:1.SDS-PAGE电泳结果显示,已成功表达并纯化出TvMIF重组蛋白。内毒素检测结果显示,已成功去除TvMIF重组蛋白的内毒素,使其低于0.1 EU/m L,可用于蛋白功能研究。2.FCM结果显示,TvMIF重组蛋白浓度小于10 ng/m L时,可促进THP-1巨噬细胞发生凋亡,其中当TvMIF浓度在5 ng/m L时,凋亡现象最为明显。而在50、100 ng/m L时可抑制THP-1巨噬细胞的凋亡。ROS结果显示,当TvMIF蛋白浓度在1 ng/m L时,ROS值明显升高。q RT-PCR结果显示,TvMIF重组蛋白浓度在1 ng/m L时,刺激THP-1巨噬细胞8 h时NLRP3、IL-1β升高较明显,刺激4 h时caspase-1和IL-18 mRNA升高较明显。3.Western blot结果显示,TvMIF刺激THP-1巨噬细胞后可引起细胞焦亡的发生和NLRP3炎症小体的形成,同时可促进细胞中caspase-1、NLRP3、pro-IL-1β的分泌。用特异性抑制剂MCC950预处理后,可明显抑制TvMIF刺激THP-1巨噬细胞后NLRP3炎症小体的形成及细胞焦亡的发生。TvMIF刺激THP-1巨噬细胞后可激活MAPK和NF-κB通路。结论:TvMIF刺激THP-1巨噬细胞可以诱导NLRP3炎症小体的生成并导致细胞焦亡的发生。MAPK信号通路和NF-κB信号通路可通过调控THP-1巨噬细胞炎症因子的表达,从而促进NLRP3炎症小体激活。使用NLRP3炎症小体的特异性抑制剂MCC950预处理后,能明显降低TvMIF刺激对THP-1巨噬细胞引起的炎症小体的激活,减少对巨噬细胞的损伤。本研究为探讨阴道毛滴虫感染引起的免疫系统炎症的发生机制提供了新思路。
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